(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202211081420.8 (22)申请日 2022.09.06 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115161364 A (43)申请公布日 2022.10.11 (73)专利权人 东北农业大 学 地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区长 江路600号 (72)发明人 姜毓君　满朝新　张宇　杨鑫焱　 苗超　 (74)专利代理 机构 南京群迈知识产权代理有限 公司 32690 专利代理师 安士影 (51)Int.Cl. C12P 19/04(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12R 1/225(2006.01) (56)对比文件 CN 105368738 A,2016.0 3.02 CN 114344344 A,2022.04.15 CN 106434786 A,2017.02.2 2 KR 102374 480 B1,202 2.03.15 WO 20182 25557 A1,2018.12.13 Yu Zhang et al. .“The effect of optimized carbo n source o n the synthesis and compositi on of exopo lysaccharides produced by Lactobaci llus paracasei ”. 《Journal of Dairy Science》 .2021,第104卷 (第4期), 张宇 等.“一株高产胞外多糖降血糖副干酪 乳杆菌JY 062 （TD062） 的黏附性与耐受性评价 ”. 《中国乳品工业》 .202 2,第50卷(第4期), 审查员 陈阜 (54)发明名称 提高副干酪乳杆菌JY062胞外多糖产量的制 法 (57)摘要 本发明公开了一种提高副干酪乳杆菌JY062 胞外多糖产量的制法， 步骤一， 从基因层面和表 型微生物碳源利用层面确定副干酪乳杆菌JY062 生成胞外多糖可利用的碳源； 步骤二， 胞外多糖 制备工艺优化； 步骤三， 优化可利用的碳源。 本发 明采用pH为6， 以甘露糖、 果糖、 葡萄糖和半乳糖 为复合碳源的优化MRS培养基， 34℃下 发酵24h制 备胞外多糖。 经试验验证表明， 采用此优化的制 备条件， 胞外多糖的产量由7 .70g/L提高到 13.31g/L， 产量 提升了72.85％。 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 115161364 B 2022.12.09 CN 115161364 B 1.一种提高副干酪乳杆菌 （ Lactobacillus  paracasei ） JY062胞外多糖产量的制法， 其 特征在于， 包括以下步骤： 步骤一， 从基因层面和表型微生物碳源利用层面确定副干酪乳杆菌JY062生成胞外多 糖可利用的碳源； 所述可利用的碳源 包括甘露糖、 海藻糖、 半乳糖、 果糖、 葡萄糖和乳糖； 步骤二， 胞外多糖制备工艺优化； 步骤三， 优化可利用的碳源； 优化后的可利用的碳源包括： 等质量添加的甘露糖、 果糖、 葡萄糖和半乳糖； 采用初始pH为6， 以甘露糖、 果糖、 葡萄糖和 半乳糖为复合碳源的优化MRS培养基， 34℃ 下发酵24h制备胞外多糖； 胞外多糖的产量由7.70g/L提高到13.31g/L， 产量提升72.85％， 胞外多糖纯度由8 8.513 μg/mL 提升到93.852 μg/mL； 所述基因层面的方法为： 通过基因组分析， 确定了副干酪乳杆菌JY062利用PTS磷酸转 移酶系统将甘露糖、 海藻糖、 半乳糖和果糖转运到细胞内， 葡萄糖和乳糖通过渗透作用进入 细胞内； 所述表型微生物碳源利用层面的方法为： 将活化后的副干酪乳杆菌JY062菌株在平板 上进行三区划线， 固体培养基培养48h后， 用Inoculatorz棉签挑取直径3mm的菌落到接种液 IF3中， 配成菌悬液； 使用棉签少量多次蘸取菌落， 将 菌悬液轻轻搅拌均匀， 保证菌悬液不起 气泡， 并用浊度仪检测， 调节菌悬液的浓度至90 ‑98%T， T为浊度单位； 在Biolog  GenIII微孔 板中， 每孔加 入100µL的菌悬液， 之后将微孔板直接放入OmniLog的孵育、 读数仪中， 37℃培 养48h， 分析菌株可利用的碳源。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115161364 B 2提高副干酪乳杆菌J Y062胞外多糖产量的制法 技术领域 [0001]本发明涉及一种提高副干酪乳杆菌JY062胞外多糖产量的制法， 属于微生物技术 领域。 背景技术 [0002]乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外常渗于培养基的一 类糖类化合物， 是微生物适应环境的产物。 近几十年来， 由于微生物胞外多糖在产品结构、 性能及生产方面所具有的特别优势而得到大力研究和开 发， 微生物胞外多糖的开 发已成为 工业微生物研究 的热点之一。 由于乳酸菌是食品级工业生产菌， 与其他菌相比安全性高， 所 以近年来对乳酸菌胞外多糖的应用逐渐增多。 乳酸菌胞外多糖可赋予发酵乳制品特殊的质 构和风味， 起到安全的食品添加剂的作用， 它还能用于食品中以提高食品的增稠性、 稳定 性、 乳化性、 胶凝性、 持水性等。 胞外多糖还具有生物活性如免疫活性、 抗肿瘤和抗溃疡， 可 应用于医药 领域。 [0003]由于乳酸菌是食品级工业生产菌， 安全性较高， 副干酪乳杆菌属于乳杆菌属中的 干酪乳杆菌群， 广泛存在于奶酪、 泡菜等 发酵食品及人体胃肠道中， 具有良好的耐酸及胆汁 抗性， 能降低血浆中胆固醇， 具有促进 人体肠道内病原体的清除、 治疗肠道菌群紊乱从而防 止食物过 敏和急性腹泻、 防止肿瘤产生 等生理作用。 [0004]胞外多糖产量低， 是制约胞外多糖大规模生产的主导因素。 乳酸菌胞外多糖 的产 量易受不同因素影响， 其中， 近年来研究最多的影响因素有菌株种类、 遗传特性以及发酵条 件。 乳酸菌菌种 产胞外多糖的能力与菌种的遗传特性有关。 胞外多糖的产量受到基因调控， 外界环境的影响对乳酸菌胞外多糖的产量也起到非常重要的作用。 培养基组成 （碳源） 与外 界环境条件 （发酵温度、 发酵时间、 pH） 均能显著影响胞外多糖的生成。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了提供一种提高副干酪乳杆菌JY062胞外多糖产量的制法， 该 法可显著提高胞外多糖的产量。 [0006]为解决上述 技术问题， 本发明采用的技 术方案为： [0007]本发明公开 一种提高副干酪乳杆菌JY 062胞外多糖产量的制法， 包括以下步骤： [0008]步骤一， 从基因层面和表型微生物碳源利用层面确定副干酪乳杆菌JY062 （Lactobaci llus paracasei  JY062） 生成胞外多糖可利用的碳源； [0009]步骤二， 胞外多糖制备工艺优化； [0010]步骤三， 优化可利用的碳源。 [0011]所述可利用的碳源 包括甘露糖、 海藻糖、 半乳糖、 果糖、 葡萄糖和乳糖。 [0012]所述基因层面 的方法为： 通过基因组分析， 确定了副干酪乳杆菌JY062利用PTS磷 酸转移酶系统将甘露糖、 海藻糖、 半乳糖和果糖转运到细胞内， 葡萄糖和乳糖通过渗透作用 进入细胞内。说　明　书 1/9 页 3 CN 115161364 B 3