(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210653311.2 (22)申请日 2022.06.09 (71)申请人 南京师范大学 地址 210023 江苏省南京市宁海路12 2号 (72)发明人 李秀娟　刘米娜　魏珺楠　张磊　 王明慧　王心悦　 (74)专利代理 机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 专利代理师 王斌 (51)Int.Cl. A62D 3/02(2007.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 11/02(2006.01) A62D 101/20(2007.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 微生物降解多环芳烃污染物的方法 (57)摘要 本发明涉及微生物领域， 公开了一种微生物 降解多环芳烃污染物的方法， 包括以下步骤： (1) 在反应溶剂中， 将微生物菌体、 可溶性锌盐与有 机配体进行混合反应， 得到仿生矿化微生物； (2) 在多环芳烃污染物存在的条件下， 将所述仿生矿 化微生物进行 发酵培养。 该方法通过在微生物表 面形成矿化保护壳， 保护微生物在多环芳烃污染 物存在的环 境中的生物降解能力， 进而提高微生 物降解多环芳烃污染物的效率。 权利要求书1页 说明书9页 附图1页 CN 115068875 A 2022.09.20 CN 115068875 A 1.一种微 生物降解多环芳烃污染物的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)在反应溶剂中， 将微生物菌体、 可溶性锌盐与有机配体进行混合反应， 得到仿生矿 化微生物； (2)在多环芳烃污染物存在的条件下， 将所述仿生矿化 微生物进行发酵培 养。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 在步骤(1)中， 所述反应溶剂为水； 优选地， 所述可 溶性锌盐选自乙酸锌、 二水合乙酸锌、 氯化锌和硝酸锌中的至少一种； 优选地， 所述有机配体为咪唑类配体， 更优选为选自1 ‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑、 1， 2 ‑二 甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(1)中， 所述微生物菌体、 所述可溶 性锌盐与所述有机配 体的重量比为1： 5 ‑12.5： 2.5 ‑5； 所述混合反应的条件 包括： 温度为3 5‑40℃， 转速为15 0‑200rpm， 时间为25 ‑35min。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(1)中， 所述微生物菌体的制备方法 包括： 将所述微生物接种到活化培养基中进 行活化培养后， 经洗涤、 固液分离得到所述微生 物菌体。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述活化培养的条件包括： pH为7.5 ‑8.5， 温度为35‑40℃， 转速为15 0‑200rpm， 时间为10 ‑12h。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(2)中， 所述发酵培养的发酵培养基 中含有： 铵盐0.8 ‑1.2g/L、 钾盐1.8 ‑2.2g/L、 镁盐0.1 ‑0.3g/L、 钙盐0.01 ‑0.03g/L和铁盐 0.4‑0.6g/L； 优选地， 所述发酵培 养的条件 包括： pH为7.5 ‑8.5， 温度为3 5‑40℃， 转速为15 0‑200rpm。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 在发酵培养前， 先将所述仿生矿化微生物 悬浮于缓冲溶液中， 得到仿生矿化微生物悬浮液， 再将所述仿生矿化微生物悬浮液进行发 酵培养； 优选地， 相对于10 00mL的所述发酵培 养基， 所述多环芳烃污染物的含量 为50‑150mg； 优选地， 所述 微生物菌体与所述多环芳烃污染物的重量比为5 ‑20： 1。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述微生物选自枯草芽孢杆菌、 蜡状芽孢 杆菌、 微黄分支杆菌和阴沟肠杆菌中的至少一种， 优选为 枯草芽孢杆菌； 优选地， 所述多环芳烃污染物选自菲、 荧 蒽、 芘和苯并芘中的至少一种， 更优选为菲。 9.根据权利要求1至8中任意一项所述的方法， 其特征在于， 该方法还包括： 在所述混合 反应的过程中加入小分子有机酸。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述小分子有机酸选自柠檬酸、 草酸和戊 二酸中的至少一种； 优选地， 所述 微生物菌体与所述小分子有机酸的重量比为1 ‑4： 1。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115068875 A 2微生物降解多环 芳烃污染物的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物领域， 具体涉及一种微 生物降解多环芳烃污染物的方法。 背景技术 [0002]多环芳烃(Polycyclic  aromatic hydrocarbons,PAHs)是一类主要来源于化石燃 料行业的持久性有机污染物， 具有致癌、 致畸、 致突变作用， 并且其自然降解十 分困难。 一般 来说， 工业化产生的PAH s会随着大气 迁移、 沉降等途径进入到水体或土壤环 境中， 被农作物 或水生动物吸收， 最终经食物链进入人体， 从而严重危害生态环境和广大人民的生命健康。 PAHs已被列入联合国环境 规划署制定的持久性有 毒化学污染物名单中。 [0003]目前， 用于PAHs污染修复的技术主要包括物理修复技术、 化学修复技术和生物修 复技术。 虽然物理修复技术和化学修复技术的修复效率较高， 但其存在修复费用昂贵和二 次污染等缺陷。 生物修复已被认为是一种经济的并且能够成功用于治理PAHs污染物的方 法， 其中微生物修复技术因其环境友好特性已成为当前 的研究热点。 微生物修复技术主要 是通过从污染环 境中筛选PAH s降解菌株， 凭借菌株自身的新陈代谢将PAH s降解为无害化代 谢产物， 从而消除PAHs对生态 环境造成的危害。 [0004]随着越来越多的具有高效PAHs降解能力的微生物被 发现， PAHs降解效率得到了极 大的提高。 然而， 用于修复的微生物施加到PAHs污染的环境后， 不仅要与土著微生物竞争， 还要经受PAHs污染物的毒性侵害， 这些因素产生的生存压力往往会造成降解菌株存活率 低、 活性弱， 最终导 致PAHs 生物修复 效果不理想。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题， 提供一种微生物降解多环芳烃污 染物的方法， 通过该方法可以在微生物表面形成矿化保护壳， 保护微生物在多环芳烃污染 物存在的环境中的生物降解能力， 进 而提高微 生物降解多环芳烃污染物的效率。 [0006]为了实现上述目的， 本发明提供一种微生物降解多环芳烃污染物的方法， 包括以 下步骤： [0007](1)在反应溶剂中， 将微生物菌体、 可溶性锌盐与有机配体进行混合反应， 得到仿 生矿化微生物； [0008](2)在多环芳烃污染物存在的条件下， 将所述仿生矿化 微生物进行发酵培 养。 [0009]优选地， 在步骤(1)中， 所述反应溶剂为水。 [0010]优选地， 所述可溶性锌盐选自乙酸锌、 二水合乙酸锌、 氯化锌和硝酸锌中的至少一 种。 [0011]优选地， 所述有机配体为咪唑类配体， 更优选为选自1 ‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑、 1， 2‑二甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑中的至少一种。 [0012]优选地， 在步骤(1)中， 所述微生物菌体、 所述可溶性锌盐与所述有机配体的重量 比为1： 5‑12.5： 2.5 ‑5； 所述混合反应的条件包括： 温度为35 ‑40℃， 转速为150 ‑200rpm， 时间说　明　书 1/9 页 3 CN 115068875 A 3