(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210623620.5 (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 广州金天芳颜化妆品有限公司 地址 510000 广东省广州市黄埔区敏盛街 12号605房 (72)发明人 魏珂　王晓娟　 (74)专利代理 机构 河北圆友缘专利代理事务所 (普通合伙) 13173 专利代理师 吴秀兰 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61P 1/02(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/245(2006.01)C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 复合益生菌、 其制备方法及其抗HP和抗口腔 龋病中的应用 (57)摘要 本申请公开了一种复合益生菌、 其制备方法 及其在抗HP和抗口腔龋病中的应用。 该制备方法 包括分别取格氏乳杆菌、 干酪乳杆菌、 副干酪乳 杆菌和酪酸梭菌进行活化； 将活化的酪酸梭菌菌 悬液接种至发酵液体培养基中培养后， 继续向发 酵体系中接种干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌菌悬 液， 继续发酵2～ 3h后； 继续向发酵体系中接种格 氏乳杆菌菌悬液， 发酵完成， 收获含有复合益生 菌的发酵液。 由此制得的复合益生菌冻干制剂不 仅具有能够改善HP引起的小鼠胃炎症反应的作 用， 还能够为Wistar大鼠抗龋病提供帮助， 具有 抗幽门螺杆菌和平衡口腔微生态的双重作用和 更加广泛的应用前 景。 权利要求书1页 说明书13页 序列表3页 附图3页 CN 114774331 A 2022.07.22 CN 114774331 A 1.一种复合 益生菌的制备 方法， 包括以下步骤： 分别取格氏乳杆菌、 干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌和酪酸梭菌进行活化； 将活化的酪酸梭菌 菌悬液接种至发酵 液体培养基中培 养4～5h后； 向发酵体系中接种干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌 菌悬液， 继续发酵2 ～3h后； 继续向发酵体系中接种格氏乳杆菌菌悬液， 发酵完成， 收获包含所述复合益生菌的发 酵液。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述发酵液体培养基包括： 乳糖 62.21g/L， 酵母浸粉46.25g/L， 酵母蛋白胨19.12g/L， 磷酸二氢钠17.25g/L， 磷酸氢二钠 1.75g/L， MgSO4·7H2O 0.96g/L， MnSO4·5H2O 0.063g/L， L‑半胱氨酸盐酸盐0.17g/L。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 酪酸梭菌发酵的条件包括： 初始pH   5.8～6.0、 温度37℃、 接种量1％， 采用25％的氨水保证发酵过程中pH值5.5， 同时通入氮气 保持罐压 0.03～0.04MPa， 发酵 过程中同时维持搅拌125rpm。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌菌的接种 量均为3～4v/v％。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌的接种同 时补入发酵体系25％体积的所述发酵 液体培养基。 6.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于， 格氏乳杆菌的接种量 为1.5～2v/v％。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 格氏乳杆菌的接种同时补入发酵体系 10％体积的所述发酵 液体培养基。 8.一种复合益生菌菌剂的制备方法， 包括权利要求1 ‑6任一项所述的制备方法， 以及收 集所述复合 益生菌的具体， 混入保护剂， 经 过能够冷冻干燥得到所述复合 益生菌菌剂。 9.一种复合益生菌菌剂， 包含不低于109cfu/g的格氏乳杆菌、 不低于108cfu/g的干 酪乳 杆菌、 不低于108cfu/g的副干酪乳杆菌和不低于1010cfu/g的酪酸梭菌， 以及不低于2.00mg/ g的表层蛋白。 10.权利要求1 ‑6任一项所述的制备方法制得的复合益生菌在制备抗幽门螺杆菌制品 和/或制备抗口腔龋病制品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774331 A 2复合益生菌、 其制备方 法及其抗HP和抗口腔龋病中的应用 技术领域 [0001]本申请涉及复合益生菌技术领域， 尤其涉及复合益生菌、 其制备方法及其抗HP和 抗口腔龋病中的应用。 背景技术 [0002]龋病， 是一种源于细菌性感染的日腔常见疾病， 严重时可继发牙髓炎和根尖周炎， 甚至会引起领骨炎症。 变形链球菌(Streptococcusmutan s， S.mutan s)是目前被公认的主要 致龋菌， 其能在牙齿表面形成牙菌斑生物膜， 为致病菌的聚集和生长提供微生态环境， 增强 致病菌本身的致病力， 还能增强其对宿主免疫系统和抗生素治疗的抵抗作用。 研究表明， 很 多疾病的发生都与日腔微生态失衡有着密切关联， 其中龋齿就是日腔微生物失衡致使牙菌 斑生物膜生成， 导致牙体硬组织发生慢性进行性破坏的疾病。 牙菌斑是 由微生物菌体以及 微生物分泌的胞外多糖、 蛋白质和矿物质薪附在牙釉质固体表面或者牙 根上的生物膜复合 体。 [0003]益生菌是一类定植于人体内， 对宿主有益的活性微生物， 它能产生确切健康功效 从而改善宿主微生态平衡、 发挥有益作用的活性有益微生物的总称。 目前已知的产生具有 口腔抗龋病的益生菌可大致分为两大类， 乳杆菌和乳酸球菌。 乳杆菌包括干酪乳杆菌 (Lactobacillus  casei)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus  acidophilus)和瑞士乳杆菌 (Lactobacillus  helveticus)等， 乳酸球菌主要有嗜热链球菌(Streptococcus   thermophi lus)和乳酸乳球菌(Lactococ cus lactic)等。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本申请的目的在于提供一种具有口腔抗龋病和抗幽门螺杆菌的复合益 生菌。 [0005]第一方面， 本申请实施例公开了一种复合 益生菌的制备 方法， 包括以下步骤： [0006]分别取格氏乳杆菌、 干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌和酪酸梭菌进行活化； [0007]将活化的酪酸梭菌 菌悬液接种至发酵 液体培养基中培 养4～5h后； [0008]向发酵体系中接种干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌 菌悬液， 继续发酵2 ～3h后； [0009]继续向发酵体系中接种格氏乳杆菌菌悬液， 发酵完成， 收获发酵液， 所述发酵液即 包含所述复合 益生菌。 [0010]在本申请实施例中， 所述发酵液体培养基成分为， 乳糖62.21g/L， 酵母浸粉 46.25g/L， 酵母蛋白胨19.12g/L， 磷酸二氢钠17.25g/L， 磷酸氢二钠1.75g/L， MgSO4·7H2O  0.96g/L， MnSO4·5H2O 0.063g/L， L‑半胱氨酸盐酸盐0.17g/L。 [0011]在本申请实施例中， 酪酸梭菌发酵的条件为： 初始pH  5.8～6.0、 温度37℃、 接种量 1％， 采用25％的氨水保证发酵过程中pH值5.5， 同时通入氮气保持罐压0.03～0.04MPa， 发 酵过程中同时维持搅拌125rpm。 [0012]在本申请实施例中， 干酪乳杆菌、 副干酪乳杆菌 菌的接种量均为3～4v/v％。说　明　书 1/13 页 3 CN 114774331 A 3