(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210600031.5 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 广州朴成生物科技有限公司 地址 511300 广东省广州市增城区增江街 经三路5号(厂房A1)二层之三 (72)发明人 张丽　黄金凤　谭荣炳　温程　 欧阳海燕 　黄金珠　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星　朱聪聪 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23K 50/30(2016.01) A23K 50/60(2016.01) A23K 10/18(2016.01)C12R 1/225(2006.01) C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 复合微生态制剂在制备修复仔猪断奶应激 引起的肠道损伤制剂中的应用 (57)摘要 本发明公开了复合微生态制剂在制备修复 仔猪断奶应激引起的肠道损伤制剂中的应用。 复 合微生态制剂 包括罗伊氏乳杆菌， 丁酸梭菌和加 氏乳杆菌。 本发明的复合微生态制剂， 其包含加 氏乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌和丁酸梭菌， 通过饮水、 拌料或喷涂饲料等不同方式饲喂断奶仔猪， 可断 奶仔猪肠道内定植， 可调控肠道 微生物菌群结构 及肠道代谢物， 抑制有害菌， 产生的微生物次生 代谢产物 丁酸可提高饲料消化利用率、 菌素可修 复肠道黏膜损伤， 提高仔猪免疫力， 解决当前断 奶仔猪养殖所面临的仔猪腹泻、 死亡率高、 断奶 体重低等问题， 满足生猪健康养殖可持续发展的 迫切需要。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115141766 A 2022.10.04 CN 115141766 A 1.复合微生态制剂在制备修复仔猪断奶应激引起的肠道损伤制剂中的应用， 其特征在 于， 所述的复合 微生态制剂， 包括罗伊氏乳杆菌， 丁 酸梭菌和 加氏乳杆菌 。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的复合微生态制 剂是将罗伊氏乳杆菌 菌液、 丁酸梭菌菌液、 加氏乳杆菌 菌液按照体积比3 00‑600： 200‑400： 100‑300混合而成。 3.根据权利要求2所述的修复仔猪断奶应激引起肠道损伤的应用， 其特征在于， 所述的 罗伊氏乳杆菌菌液， 其活菌数 ≥1.0×109cfu/mL； 丁酸梭菌菌液， 其活菌数 ≥5.0×108cfu/ mL； 加氏乳杆菌 菌液， 其活菌数≥1.0 ×109cfu/mL。 4.根据权利要求1所述的修复仔猪断奶应激引起肠道损伤的应用， 其特征在于， 所述的 复合微生态制剂中包括罗伊氏乳杆菌(1.0～1.8) ×109cfu/mL、 丁酸梭菌(4.0～6.0) × 108cfu/mL和 加氏乳杆菌(1.0～1.8) ×109cfu/mL。 5.根据权利要求1、 2、 3或4所述的应用， 其特征在于， 所述的加氏乳杆菌是通过以下方 法制备的： 将加氏乳杆菌种子液以体积比3 ‑8％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中 进行二级发酵， 发酵罐装液量为70 ‑80％， 发酵温度30 ±1℃， 密闭静置培养， 发酵时间20 ‑ 24h， 检测pH降低至4.0 ‑4.5而且不再变化时， 即可以结束发酵， 由此制备 得到加氏乳杆菌； 所述的二级发酵培养基是每升含有糖蜜20g、 硝酸铵5g、 牛肉膏3g、 酵母粉5g、 乳糖5g、 氯化钠5g， pH 6.8。 6.根据权利要求1、 2、 3或4所述的应用， 其特征在于， 所述的罗伊氏乳杆菌是通过以下 方法制备的： 将罗伊氏乳杆菌种子液以体积比3 ‑6％的接种量转接到含有产甘油脱水酶发酵培养基 中进行发酵， 发酵罐装液量为50 ‑65％， 发酵温度28 ‑32℃， 微氧培养， 转速80 ‑100rpm， 用 NaOH调节pH， 控制整个发酵产酶pH5.5 ‑7.0， 发酵时间18 ‑25h后， 以变速流加的方式流加已 灭菌冷却的甘油到菌液中， 甘油溶液和菌液体积比： 1 ‑5∶99‑95， 酶转化温度： 28 ‑32℃， 时间 1‑5h， 检测pH降低至4.0 ‑4.5而且不再变化时， 即可以结束发酵， 由此制备得到罗伊氏乳杆 菌； 所述的产甘油脱水酶发酵培 养基为每升含有糖蜜25g、 牛肉膏4g、 酵母 粉4g， pH 6.0。 7.根据权利要求1、 2、 3或4所述的应用， 其特征在于， 所述的丁酸梭菌是通过以下方法 制备的： 将丁酸梭菌种子液以体积比3 ‑8％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进 行二级发酵， 发酵罐装液量为70 ‑80％， 发酵温度37 ±1℃， 密闭静置培养， 发酵时间40 ‑52h， 检测pH降低至4.0 ‑4.5而且不再变化时， 即可以结束发酵， 由此制备 得到丁酸梭菌； 所述的二级发酵培养基为每升含有蛋白胨3g、 酵母浸粉20g、 葡萄糖5g、 可溶性淀粉8g、 氯化钠5g、 七水硫酸镁0.2g、 L ‑半胱氨酸盐酸盐0.5g、 一水硫酸锰0.2g， pH7.0 ±0.2。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141766 A 2复合微生态制剂在制备 修复仔猪断奶应激引起的肠道损伤制 剂中的应用 技术领域： [0001]本发明属于家畜饲养领域， 具体涉及复合微生态制剂在制备修复仔猪断奶应激引 起的肠道损伤制剂中的应用。 背景技术： [0002]仔猪养殖是生猪养殖中至关重要的环节， 仔猪阶段的饲养与管理直接影响生猪的 出栏时间、 出栏率、 出栏重等指标， 从而影响生猪养殖的生产效益。 随着养猪现代化水平的 不断提高， 目前国内外养殖场通过缩短仔猪断奶日龄(从35 ‑42日龄降低至21 ‑28日龄甚至 更早的断奶日龄)提高母猪的年产胎次和繁殖效率， 同时仔猪早期断奶可以提高分娩舍利 用率、 猪群健康水平和节省种猪饲料。 但仔猪在早期断奶时期自身消 化系统和免疫功能尚 未成熟， 会导致仔猪出现腹泻、 肠道菌群紊乱、 肠道结构和功能及肠道屏障受损， 免疫力降 低、 增重缓慢、 死亡率升高等断奶应激问题， 给养殖企业造成巨大 的经济损失。 现仔猪断奶 应激主要通过添加抗生素、 高剂量微量元素等进 行调控， 在缓解仔猪断奶应激、 降低腹泻的 同时， 也带来了畜产品抗生素残留、 肠道微生态失调以及病原菌耐药性增加等问题， 并严重 的污染了养殖环境， 对人类健康构成了严重的威胁。 因此， 调控仔猪肠道健康缓解断奶应 激、 提高营养物质消化率， 寻找环保有效的抗生素替代品对畜牧业绿色、 健康发展， 降低细 菌耐药性， 具有重要作用。 [0003]肠道微生物在调控动物营养物质消化、 肠道屏障、 免疫应答及内分泌等多种生理 过程中发挥重要作用， 肠道菌群失调易位会引起肠细胞凋亡、 肠道物理屏障受损及肠道免 疫功能紊乱， 进而动物生长发育迟缓、 腹泻甚至死亡。 体内和体外试验研究表明， 微生物制 剂可通过多种不同的机制抑制有害菌， 包括占位和竞争营养物质， 直接抑制特定病原微生 物， 产生细菌素、 多肽等直接抑菌化合物， 产生短链脂肪酸、 降低肠道pH， 调节免疫反应和调 控肠上皮基因表达如黏蛋白等， 免受有害微生物侵害。 仔猪 断奶应激尤为突出 的问题是严 重的引起肠道结构和功能、 肠道屏障受损， 引发肠炎， 导致仔猪腹泻， 严重会导致死亡。 本发 明针对仔猪断奶应激引起的肠道损伤问题， 筛选了具有修复仔猪断奶应激引起的肠道损伤 的功能菌株， 通过发酵工艺优化， 制备一种修复仔猪 断奶应激引起的肠道损伤的复合微生 态制剂用于断奶仔猪养殖， 通过调控仔猪肠道菌群结构及肠道代谢物， 修复仔猪 断奶应激 引起的肠道损伤， 解决当前仔猪断奶应激阶段养殖所面临的仔猪腹泻、 死亡率高等问题， 替 代养殖中抗 生素的使用， 促进生猪养殖业的绿色健康可持续发展。 发明内容： [0004]本发明的目的是提供复合微生态制剂在制备修复仔猪断奶应激引起的肠道损伤 制剂中的应用。 本发明的复合微生态制剂能通过调控仔猪肠道菌群结构及肠道代谢物， 修 复仔猪断奶应激引起的肠道损伤， 解决当前仔猪断奶应激阶段养殖所面临的仔猪腹泻、 死 亡率高等问题， 替代养殖中抗 生素的使用， 促进生猪养殖业的绿色健康可持续发展。说　明　书 1/8 页 3 CN 115141766 A 3