(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210643367.X (22)申请日 2022.06.09 (71)申请人 南京工业大 学 地址 211816 江苏省南京市浦口区浦珠南 路30号 (72)发明人 董维亮　刘婧媛　王彤　周小力　 周杰　 (74)专利代理 机构 江苏致邦律师事务所 32 230 专利代理师 尹妍　徐蓓 (51)Int.Cl. C12N 11/16(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C09K 17/14(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C09K 101/00(2006.01) (54)发明名称 利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方 法及其应用 (57)摘要 本发明涉及利用黏细菌构建生物粘附固定 化菌膜的方法及其应用， 取待成膜菌株和粘细菌 分别培养后， 离心制成菌悬液； 将待成膜菌株和 粘细菌的菌悬液共同转接至成膜培养基培养， 形 成菌膜； 所述成膜培养基为CYE培养基、 CYE稀释 培养基或MSM培养基； 所述CYE稀释培养基为稀释 50倍的CYE培养基。 发明固定化菌膜采用了一种 通过结合黏细菌建立生物粘附膜结构提高外源 微生物菌群的降解效率和环境稳定性的新策略。 降解菌群经过生物粘附成膜后， 其对环境变化的 耐受性显著提高， 尤其是对酸性条件和高底物浓 度环境的鲁棒性更强。 生物膜结构为降解体系提 供的保护， 有助于建立多种微生物的共存关系， 并起到保护和维稳结构的作用。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 114958822 A 2022.08.30 CN 114958822 A 1.一种利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法， 其特 征在于， 包括： 取待成膜菌株和粘细菌分别培 养后， 离心制成菌悬 液； 将待成膜菌株和粘细菌的菌悬 液共同转接 至成膜培 养基培养， 形成菌膜； 所述成膜培养基为CYE培养基、 CYE稀释培养基或MSM培养基； 所述CYE稀释培养基为稀 释50倍的CYE培养基。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述待成膜菌株和粘细菌的菌悬液按体积 比3~9:1共同转接 至成膜培 养基培养。 3. 根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述粘细菌选用黄色粘球菌 （ Myxococcus   xanthus） DK1622。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述成膜培 养基为MSM 培养基。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 取待成膜菌株和粘细菌分别培养后， 离心 制成OD600nm=1.0的菌悬 液。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 将待成膜菌株和粘细菌的菌悬液共同转接 至成膜培 养基震荡培 养。 7.权利要求1~6任一项所述利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法在强化修复化 学农药中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 包括： 将用于修复化学农药的微生物降解 体系使用的微生物菌株作为待成膜菌株， 在成膜培养基中通过生物粘附固定化制成菌膜， 用于化学农药的强化 修复。 9.根据权利要求7或8所述的应用， 其特征在于， 所述化学农药为草乙胺， 将用于修复草 乙胺的菌株和粘细菌的菌悬 液按照体积比3~9： 1共同转接 至成膜培 养基培养。 10. 根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 固定化菌膜的降解环境为： 温度25~37 ℃、 pH 4.0~8.0、 乙草胺浓度5 0~200 mg·L‑1。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958822 A 2利用黏细菌构建生物粘附固定化 菌膜的方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一种固定化菌膜用于强化修复化学农药的方法， 具体涉及 一种利用黏 细菌进行生物粘附固定化 微生物的方法， 属于农药污染生物修复技 术领域。 背景技术 [0002]当使用游离细胞降解有毒物质时， 存在处理困难、 细胞密度降低、 与土著微生物竞 争以及适应不良和渗透率降低等问题， 无法有效的在所需地点的生态位稳定存在。 为了减 轻游离形式细胞所存在的劣势， 微生物修复技术已经通过使用额外的处理来加速降解并确 保微生物的存活和活力。 固定化微生物技术是化学农药降解的一种潜在优化方法， 其特点 是将细胞限制在一个划定的区域， 细胞在该区域保持其代谢、 分解代谢和催化活性。 [0003]在自然界中固定微生物的一种自然方式是通过生物粘附形成微生物群落， 最常见 的形式就是广泛存在的生物膜。 具有高细胞密度和抗压力特性的生物膜结构可以减轻生物 修复过程受环境条件的影响， 其生物蓄积能力还可加速有机污染物的生物修复。 此外， 生物 粘附物质可为细胞提供粘附性， 有助于建立多种微生物的共存关系， 有可能为高效生物修 复过程提供一个合 适的微环境。 [0004]黏细菌是具有大基因组的δ组变形菌， 其特征是革兰氏阴性、 产粘液细菌， 它在土 壤中的丰度为0.4％ ‑4.5％， 是土壤细菌群落的重要组成部分， 也是土壤微生物 生态的调节 者。 黏细菌可以分泌不同种类的长链多糖， 这些生物粘附物质可用于保留和组织细胞， 以及 在细胞外基质的范围内物理和生化地缓冲微生物群落， 从而提高细菌存活率和适应性。 此 外， 黏细菌作为微生物食物网结构 中的捕食者， 可通过多种模式攻击猎物以获取营养并建 立竞争优势， 研究发现其捕食能力具有调控性， 可以在一定程度上调节微生物群落结构 。 因 此黏细菌有望作为生物粘附辅助菌， 用于通过形成生物膜对微生物多菌体系进行固定化和 调节群落结构。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法及 其应用， 从 而为化学农药面源污染的生物修复提供一条全新的技术路线， 以解决现有技术中微生物在 化学农药的实际修复应用中效率低、 稳定性差、 运行周期长等问题。 [0006]为实现上述 技术目的， 本发明采用如下 方案： [0007]一种利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法， 包括： [0008]取待成膜菌株和粘细菌分别培 养后， 离心制成菌悬 液； [0009]将待成膜菌株和粘细菌的菌悬 液共同转接 至成膜培 养基培养， 形成菌膜； [0010]所述成膜培养基为CYE培养基、 CYE稀释培养基或MSM培养基； 所述CYE稀释培养基 为稀释50倍的CYE培养基。 [0011]作为一种优选的实施方式， 所述待成膜菌株和粘细菌的菌悬液按体积比3～9:1共 同转接至成膜培 养基培养。说　明　书 1/5 页 3 CN 114958822 A 3