(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210815974.X (22)申请日 2022.07.12 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.7097 2013.01.08 (71)申请人 天津大学 地址 300350 天津市津南区海河教育园雅 观路135号天津大 学北洋园校区 (72)发明人 程景胜　白松　乔斌　侯正杰　 元英进　 (74)专利代理 机构 天津市北洋 有限责任专利代 理事务所 12 201 专利代理师 陆艺 (51)Int.Cl. C12P 21/00(2006.01) C12P 7/6409(2022.01)C12N 1/16(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 共培养解淀粉芽孢杆菌和重组解脂耶氏酵 母促进脂肽生产的方法 (57)摘要 本发明公开了共培养解淀粉芽孢杆菌和重 组解脂耶氏酵母促进脂肽生产的方法， 步骤： (1) 种子培养； (2)发酵培养： 先将重组解脂耶氏酵母 的二级种子按OD600为0.2～0.4接种到发酵培养 基中在28 ‑32℃、 180～200rpm的条件下培养6～ 8h； 再按OD600为0.2～0.4接种解淀粉芽孢杆菌的 二级种子， 在28 ‑32℃、 180～200rpm的条件下发 酵。 本发明的方法能够有效提升脂肽产量， 方法 简单， 成本低廉。 在含处理后的厨余垃圾的发酵 培养基中， 解淀粉芽孢杆菌和重组解脂耶氏酵母 可以互利共生， 将厨余垃圾中的淀粉和脂质向脂 肽和脂肪酸转化， 实现厨余垃圾的无公害化和资 源化处理， 联产脂肽和脂肪酸。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115369141 A 2022.11.22 CN 115369141 A 1.共培养解淀粉芽孢杆菌和重组解脂耶氏酵母促进脂肽生产的方法， 其特征是包括如 下步骤： (1)种子培养： 将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus  amyloliquefaciens)培养得到解淀粉芽孢杆菌的一级 种子， 再继续培 养得到解淀粉芽孢杆菌的二级种子； 将重组解脂耶氏酵母(Yarrowia  lipolytica)培养得到重组解脂耶氏酵母的一级种 子， 再继续培 养得到重组解脂耶氏酵母的二级种子； (2)发酵培养： 先将重组解脂耶氏酵母的二级种子按OD600为0.2～0.4接种到发酵培养 基中在28 ‑32℃、 180～2 00rpm的条件下培养6～8h； 再按OD600为0.2～0.4接种解淀粉芽孢杆 菌的二级种子， 在28 ‑32℃、 180～ 200rpm的条件下发酵120～15 0h。 2.根据权利 要求1所述的方法， 其特征是所述发酵培养基以g/L计包括： 葡萄糖100或处 理后的厨余垃圾100， 酵母浸粉10， 蛋白胨10， L ‑谷氨酸钠一水化合物14， KCl  5， KH2PO4 1， MgSO4·7H2O 1， FeSO4 1.5×10‑4， MnSO4 5.0×10‑3， CuSO4 1.6×10‑4， pH为6.7， 115℃蒸 汽灭 菌15min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369141 A 2共培养解淀 粉芽孢杆菌和重组解脂耶氏酵母促进脂肽生产的 方法 技术领域 [0001]本发明属于发酵工程技术领域， 涉及一种共培养解淀粉芽孢杆菌和重 组解脂耶氏 酵母促进脂肽生产的方法。 背景技术 [0002]脂肽类化合物是由亲水性的线状或环状肽在N端连接亲脂性的脂肪酸链组成， 两 亲性的特性赋予其广谱的抗真菌活性， 可作为新型绿色农业用于生物防治。 针对提升脂肽 的研究主要为外源调控和内源调控两方面。 外源调控包括响应面法优化培养基、 优化碳源、 添加脂肪酸、 氨基酸和微量元素等； 内源调控包括启动子工程、 代谢工程、 操纵脂肽合成调 控因子和全局代谢途径优化等。 然而低生产效率和高生产成本是限制其在农业方面应用的 主要因素， 目前已有研究利用共培养产脂肽菌和产淀粉酶或脂肪酶菌降解酒糟或厨余等低 劣生物质来促进脂肽生产， 从而达到提升产量平衡经济效益的目的， 然而距离大规模生产 仍具有一定差距， 且 无法对厨余进 行充分转化。 厨余垃圾多来源于城市生活垃圾， 不当处理 会造成严重的环境影响和经济浪费。 厨余垃圾中富含碳水化合物、 脂质等有机物， 经过预 处 理后十分适合微生物 生长繁殖， 并且以厨余垃圾为底物合成 高附加值产 物可以进一步增大 其生物转化价值。 由于厨余垃圾中成分复杂， 单一微生物难以完全降解厨余垃圾中的有机 物质， 因此需要构建更有效地 生物转化体系克服复杂底 物带来的代谢压力问题。 发明内容 [0003]本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供利用共培养解淀粉芽孢杆菌和重 组解 脂耶氏酵母促进脂肽生产的方法。 [0004]本发明的技 术方案概 述如下： [0005]共培养解淀粉芽孢杆菌和重组解脂耶氏酵母促进脂肽生产的方法， 包括如下步 骤： [0006](1)种子培养： [0007]将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus  amyloliquefaciens)培养得到解淀粉芽孢杆菌的 一级种子， 再继续培 养得到解淀粉芽孢杆菌的二级种子； [0008]将重组解脂耶氏酵母(Yarrowia  lipolytica)培养得到重组解脂耶氏酵母的一级 种子， 再继续培 养得到重组解脂耶氏酵母的二级种子； [0009](2)发酵培养： 先将重组解脂耶氏酵母的二级种子按OD600为0.2～0.4接种到发酵 培养基中在28 ‑32℃、 180～200rpm的条件下培养6～8h； 再按OD600为0.2～0.4接种解淀粉芽 孢杆菌的二级种子， 在28 ‑32℃、 180～ 200rpm的条件下发酵120～15 0h。 [0010]所述发酵培养基以g/L计包括： 葡萄糖100或处理后的厨余垃圾100， 酵母浸粉10， 蛋白胨10， L ‑谷氨酸钠一水化合物14， KCl  5， KH2PO4 1， MgSO4·7H2O 1， FeSO4 1.5×10‑4， MnSO4 5.0×10‑3， CuSO4 1.6×10‑4， pH为6.7， 1 15℃蒸汽灭菌15mi n。说　明　书 1/6 页 3 CN 115369141 A 3