(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210996009.7 (22)申请日 2022.08.18 (71)申请人 中国疾病预防控制中心传染病预防 控制所 地址 102206 北京市昌平区昌百路15 5号 (72)发明人 朴东日　姜海　赵鸿雁　范玉　 田国忠　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 孙怡 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别布鲁氏菌的培 养基及方法 (57)摘要 本发明涉及微生物 鉴别技术领域， 具体涉及 一种鉴别布鲁氏菌的培养基及方法。 本发明的鉴 别布鲁氏菌的培养基， 其为双相培养基， 包括固 相和液相； 所述液相中包括酚红和尿素。 本发明 的培养基在满足布鲁氏菌生长繁殖对营养需要 的前提下， 可 以提高培养的布鲁氏菌鉴别效率， 筛除大部分其它细菌， 减少常规布鲁氏菌鉴别时 的病原操作量， 降低生物安全风险， 为临床快速 诊断提供参考， 且可通过培养基颜色发生改变时 间的快慢， 将猪种、 犬种布鲁氏菌和牛种、 羊种布 鲁氏菌进行区分。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115466694 A 2022.12.13 CN 115466694 A 1.一种鉴别布鲁氏菌的培养基， 其特征在于， 所述培养基为双相培养基， 包括固相和液 相； 仅在所述液相中包括 酚红和尿素。 2.根据权利要求1所述的培养基， 其特征在于， 所述液相中尿素的浓度为19 ‑21g/L， 优 选为20g/L。 3.根据权利要求1或2所述的培养基， 其特征在于， 所述固相和液相中均包括蛋白胨、 酵 母浸粉、 胰酪蛋白胨、 氯化钠、 葡萄糖和亚硫酸氢钠。 4.根据权利 要求3所述的培养基， 其特征在于， 所述 固相在未凝固前， 每1000mL包括： 蛋 白胨9‑11g、 酵母浸粉1.8 ‑2.2g、 胰酪蛋白胨9 ‑11g、 氯化钠4.5 ‑5.5g、 葡萄糖0.8 ‑1.2g、 亚硫 酸氢钠0.08 ‑0.12g、 琼脂14 ‑16g， 余量为水， pH值 为7.1‑7.3； 和/或， 所述液相每10 00mL包括： 95 0mL的组分A和5 0ml、 38‑42％的尿素 水溶液； 每950mL的所述组分A包括： 蛋白胨9 ‑11g、 酵母浸粉1.8 ‑2.2g、 胰酪蛋白胨9 ‑11g、 氯化 钠4.5‑5.5g、 葡萄糖0.8 ‑1.2g、 亚硫酸氢钠0.08 ‑0.12g和酚红0.018 ‑0.022g， 余量为水， pH 值为7.1‑7.3。 5.根据权利 要求4所述的培养基， 其特征在于， 所述 固相在未凝固前， 每1000mL包括： 蛋 白胨10.0g、 酵母浸粉2.0g、 胰酪蛋白胨10.0 g、 氯化钠5.0 g、 葡萄糖1.0 g、 亚硫酸氢钠0.1g、 琼脂15.0g， 余 量为水， pH值 为7.2； 和/或， 所述液相每10 00mL包括： 95 0mL的组分A和5 0ml、 40％的尿素 水溶液； 每950mL的所述组分A包括： 蛋白胨10.0g、 酵母浸粉2.0g、 胰酪蛋白胨10.0g、 氯化钠 5.0g、 葡萄糖1.0g、 亚硫酸氢钠0.1g和酚红0.02g， 余 量为水， pH值 为7.2。 6.根据权利要求1 ‑5任一项所述的培养基， 其特征在于， 所述固相的一部分浸没在所述 液相中， 当进行检测时， 所述液相与待测样品混合后的液体一起浸没所述固相的40 ‑50％， 所述液相与待测样品的体积比为(8 ‑12)： 1， 优选为8 :1。 7.一种制备权利要求1 ‑6任一项所述的培养基的方法， 其特征在于， 在制备液相时， 先 将除尿素外的其 余组分混合、 调整pH值后， 再加入尿素 水溶液。 8.一种鉴别布鲁氏菌的方法， 其特征在于， 包括以权利要求1 ‑6任一项所述的培养基进 行菌株培 养的步骤， 并通过观察培 养基颜色的变化和颜色变化的时间点 来鉴别布鲁氏菌 。 9.根据权利 要求8所述的方法， 其特征在于， 培养在普通大气环境条件， 37 ±0.2℃下进 行。 10.根据权利要求8或9所述的方法， 其特征在于， 当所培养的菌株在24～48小时之间使 培养基颜色变为粉色， 则判断存在猪种或犬种布鲁氏菌； 当所培养的菌株在48小时之后使 培养基颜色变为粉色， 则判断存在牛种或羊种布鲁氏菌 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115466694 A 2一种鉴别布鲁氏菌的培养基 及方法 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物鉴别技 术领域， 具体涉及一种鉴别布鲁氏菌的培 养基及方法。 背景技术 [0002]布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病， 是由细胞内寄生的布鲁氏菌属(Brucella) 细菌引起的一种人兽共患传染—变态反应性疾病。 布鲁氏菌属是一组球状、 球杆状、 和卵圆 形革兰氏阴性细菌。 布鲁氏菌生长繁殖缓慢， 通常需要培养2 4～72小时可见生长， 有的需要 5～10天， 甚至更长， 布鲁氏菌适宜的pH为6.6～7.4。 [0003]常见地， 分离到的布鲁氏菌几乎全部是羊种、 牛种、 猪种和犬种， 其中70％以上是 羊种菌。 临床上采集全血样 本后， 通常使用全自动血培养仪或双相培养瓶进行培养， 阳性报 警或者培养液浑浊后继续分离纯培养， 然后再通过后续 实验对样本中的病原菌进 行鉴别判 断是否为布鲁氏菌 。 [0004]但这些方法鉴别效率较低， 操作复杂， 仍需要 进一步研究改进。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种鉴别效率高、 操作简便安全的布鲁氏菌鉴别培养基及 方法。 [0006]具体地， 本发明提供以下技 术方案： [0007]一种鉴别布鲁氏菌的培养基， 所述培养基为双相培养基， 包括固相和液相； 仅在所 述液相中包括 酚红和尿素。 [0008]本发明提供了一种双相布鲁氏菌鉴别培养基， 本发明根据布鲁氏菌生长繁殖和菌 落形态特性， 在双相 培养基的基础上仅在液相中加入了酚红和尿素， 从而使得在以该培养 基进行细菌培养后， 可通过观察培养基液相颜色的变化和颜色变化的时间点来鉴别布鲁氏 菌及不同宿主来源的布鲁氏菌 。 [0009]优选， 还可根据培养时培养基液相颜色的改变， 及培养基固相生长菌落形态的观 察， 综合鉴别培养的细菌是否为布鲁氏菌， 准确性更强， 可以初筛掉大部分其它非布鲁氏 菌， 提高了布鲁氏菌鉴别效率， 减少分离布鲁氏菌的工作量。 且固相中不加尿素及酚红， 可 利于观察固相表面 生长的细菌 菌落形态， 并减少了生产步骤， 降低了 污染的风险。 [0010]本发明的培 养基中， 所述液相中尿素的浓度为19 ‑21g/L， 优选为20g/L。 [0011]本发明的培养基中， 所述固相和液相中均包括蛋白胨、 酵母浸粉、 胰酪蛋白胨、 氯 化钠、 葡萄糖和亚硫酸氢钠。 [0012]优选， 本发明的培养基中， 所述固相在未凝固前， 每1000mL包括： 蛋白胨9 ‑11g、 酵 母浸粉1.8 ‑2.2g、 胰酪蛋白胨9 ‑11g、 氯化钠4.5 ‑5.5g、 葡萄糖0.8 ‑1.2g、 亚硫酸氢钠0.08 ‑ 0.12g、 琼脂14 ‑16g， 余量为水， pH值 为7.1‑7.3； [0013]和/或， 所述液相每10 00mL包括： 95 0mL的组分A和5 0ml、 38‑42％的尿素 水溶液； [0014]每950mL的所述组分A包括： 蛋白胨9 ‑11g、 酵母浸粉1.8 ‑2.2g、 胰酪蛋白胨9 ‑11g、说　明　书 1/6 页 3 CN 115466694 A 3