(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211040841.6 (22)申请日 2022.08.29 (71)申请人 湖南加农正和生物技 术有限公司 地址 410000 湖南省长 沙市浏阳 经济技术 开发区康宁路321号 (72)发明人 张运强　柳高峰　周探科　师家伟　 向玮　 (74)专利代理 机构 湖南正则奇美专利代理事务 所(普通合伙) 4310 5 专利代理师 李猛 (51)Int.Cl. C12P 7/6434(2022.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/12(2006.01) A23K 20/158(2016.01)A23L 33/12(2016.01) A23K 10/12(2016.01) A23L 33/10(2016.01) C12R 1/89(2006.01) C12R 1/32(2006.01) (54)发明名称 一种裂殖壶菌发酵产物及其制备方法与应 用 (57)摘要 本发明公开了一种裂殖壶菌发酵产物及其 制备方法与应用， 涉及发酵技术领域； 该方法包 括以下步骤： S1、 配置种子 液： 将裂殖壶菌接种至 液体培养基中培养， 制得种子液； S2、 发酵： 将步 骤S1制得的种子液接种至发酵培养基中首次发 酵24h～36h后； 再补充发酵补液半流体发酵14h ～26h。 本发明发酵产物的制备方法获得了较高 生物量的同时富集了较高水平的DHA， 并具有规 模生产的条件； 同时本发明还在在较 短时间内获 得高生物量高含量的裂殖壶菌DHA， 且含量较为 稳定； 因此具有能耗低、 成本低、 可流程化、 可规 模化等优势。 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 115161356 A 2022.10.11 CN 115161356 A 1.一种裂殖壶菌发酵产物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 配置种子液： 将裂殖壶菌 接种至液体培 养基中培 养， 制得种子液； S2、 发酵： 将步骤S1制得的种子液接种至发酵培养基中首 次发酵24h～36h后； 再补充发 酵补液半流体发酵14h～ 26h； 所述发酵培 养基中各组分的质量浓度如下： 右旋葡萄糖30g/L～35g/L、 酵母浸粉5g/L～7g/L、 牛乳蛋白胨6g/L～8g/L、 海盐18 g/L ～22g/L和草分枝杆菌发酵 液50g/L～60g/L。 2.根据权利要求1所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述发酵补液与 所述发酵培 养基的质量之比为10～12:10 0。 3.根据权利要求1所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述草分枝杆菌 发酵液的制备 方法， 包括以下步骤： 将草分枝杆菌 接种至草分枝杆菌 培养基中发酵后灭菌； 所述草分枝杆菌 培养基中各组分的质量浓度如下： 甘油3g/L～5g/L、 葡萄糖8g/L～10g/L、 磷酸二氢钾0.1g/L～0.3g/L、 磷酸氢二钠0.1g/ L～0.3g/L、 谷氨酸钠0.5g/L～0.9g/L、 柠檬酸三钠0.3g/L～0.6g/L、 硫酸锌0.05g/L～ 0.07g/L、 硫酸铜0.3g/L～0.5g/L和生物素0.02g/L～0.04g/L。 4.根据权利要求1至3任一项所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述 发酵补液中各组分的质量浓度如下： 琼脂3g/L～4g/L、 海泡石粉2g/L～3g/L、 聚硅氧烷4g/L～6g/L、 苹果酸25g/L～35g/L、 氯化钠140g/L～150g/L、 硫酸镁10g/L～15 g/L， 磷酸二氢钾5 g/L～7g/L、 氯化钾3g/L～6g/ L、 硫酸锰0.0 3g/L～0.04g/L和硫酸锌0.04g/L～0.0 5g/L。 5.根据权利要求1所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述首次发酵需 补充葡萄糖溶 液； 所述葡萄糖溶 液与所述发酵培 养基的质量比为9 ～10:100。 6.根据权利要求5所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述葡萄糖溶液 的质量分数为 45％～52％。 7.根据权利要求1所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述首次发酵的 温度为22℃～25℃。 8.根据权利要求1所述的裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 其特征在于， 所述半流体发酵 的温度为10℃～15℃。 9.一种如权利要求1至8任一项所述的制备 方法制得的发酵产物。 10.一种如权利要求9所述的发酵产物在制备食品添加剂和/或饲料 添加剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115161356 A 2一种裂殖壶菌发酵产物及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于发酵技 术领域， 具体是一种裂殖壶菌发酵产物及其制备 方法与应用。 背景技术 [0002]DHA(Docosahexaenoic  Acid， 二十二碳六烯酸)作为一种高营养价值的添加剂当 前广泛应用于食品添加和饲料添加领域， 规模化生产DHA的方法主要通过微生物发酵产物 获得， 裂殖壶菌由于具有耐受性高、 DHA产量大等优势， 是当前常规 发酵生产D HA的微生物菌 种， 然而常规的裂殖壶菌发酵生产DHA为固体发酵和液体发酵， 其中固体发酵由于其DHA含 量低， 且需要添加载体， 并对后续处理工艺和成本要求高， 在实际生产上无法实现规模化。 因此裂殖壶菌发酵通常采用液体发酵， 但这种发酵方式依然存在着一定的弊端， 其一为裂 殖壶菌在生长阶段不能很好地进行生物量富集， 使最后的裂殖壶菌细胞体和DHA产量无法 达到最大化； 其二为裂殖壶菌在DHA富集过程中的通路主要为PKS(polyketide  synthases， 聚酮合酶)途径， 若通过PKS途径 富集高含量D HA， 其特点为通过环 境形态和低溶氧等胁迫促 使裂殖壶菌激活PKS途径， 而 液体发酵的特点并不能支撑裂殖壶菌很好地达到PKS途径激活 的特点。 即相关技 术中发酵 方式存在发酵时间长、 DHA产量低和成本高的问题。 [0003]综上所述， 本发明提出了一种裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 该方法提升了DHA的 产量。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种裂殖壶菌发酵产物的制备方法， 以解决上述背景技术 中提出的问题和缺陷的至少一个方面。 [0005]本发明还提供了一种上述制备 方法制得的发酵产物。 [0006]本发明还提供了上述发酵产物的应用。 [0007]具体如下： 本发明第一方面提供了一种裂殖壶菌发酵产物的制 备方法， 包括以下 步骤： [0008]S1、 配置种子液： 将裂殖壶菌 接种至液体培 养基中培 养， 制得种子液； [0009]S2、 发酵： 将 步骤S1制得的种子液接种至 发酵培养基中首次发酵24h～36h后； 再补 充发酵补液半流体发酵14h～ 26h； [0010]所述发酵培 养基中各组分的质量浓度如下： [0011]右旋葡萄糖30g/L～35g/L、 酵母浸粉5g/L～7g/L、 牛乳蛋白胨6g/L～8g/L、 粗海盐 18g/L～22g/L和草分枝杆菌发酵 液50g/L～60g/L。 [0012]根据本发明制备 方法技术方案中的一种技 术方案， 至少具 备如下有益效果： [0013]本发明利用草分枝杆菌的益生元作用； 在首次发酵过程中促进裂殖壶菌生长和活 性， 极大促进极大促进裂殖壶菌生物量的富集； 同时以半流体发酵的方式极大地使裂殖壶 菌富集DHA， 大幅度减少了发酵时间、 提高了DHA产量和降低了成本， 更好地实现了DHA工业 化生产。说　明　书 1/9 页 3 CN 115161356 A 3