ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2811—2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术 规范 Molecular detection for pathogen of Corynespora leaf fall disease of rubber tree 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2811—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：谢艺贤、漆艳香、张欣、蒲金基、张贺、陆英、喻群芳、张辉强。 行业标准信息服务平台 NY/T 2811—2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术规范 1 范围 本标准规定了橡胶树棒孢霉落叶病病原菌（Corynesporacassiicola）的术语和定义、检测方法、结果 判定、样品保存等技术要求。 本标准适用于橡胶树的棒孢霉落叶病病原菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 橡胶树棒跑霉落叶病corynespora leaf falldisease of rubber tree 由多主棒孢[Corynesporacassicola（Berk。etCurt.）Wei引起的-种为害橡胶树叶片和嫩梢 的真菌病害。该病害病原菌的学名、形态特征及其危害症状参见附录A。 4检测方法 4.1原理 根据橡胶树棒孢霉落叶病病原菌核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）特有碱基序列设计特异 性引物进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期272bp的DNA片段，判断样品中是否携带橡胶树棒孢 霉落叶病病原菌。 4.2仪器 显微镜（10×40倍）、高压灭菌锅、高速冷冻离心机（最大离心力25000×g）、PCR扩增仪、电泳仪及 紫外凝胶成像仪等。 4.3试剂及配制方法 4. 3. 11 mol/ L Tris - HCI(pH 8. 0) 称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris，优级纯）溶解于800mL一级超纯水中，用盐酸（HCl,分析 纯）调pH至8.0,加超纯水定容至1000mL。分装后高温灭菌(121℃)20min，4℃或室温保存备用。 4. 3. 210 mol/L NaOH 称取80.0g氢氧化钠（NaOH，分析纯）溶解于160mL一级超纯水中，溶解后再加一级超纯水定容 到200mL。 4. 3. 3 1 mol/L EDTA - Na (pH 8. 0) 称取372.2g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2，优级纯），溶解于70mL级超纯水中，再加人适量 NaOH溶液（4.3.2），加热至完全溶解后，冷却至室温，再用NaOH溶液（4.3.2)调pH至8.0，加超纯水 定容至100mL。分装后高温灭菌（121℃）20min，4℃或室温保存备用。 4.3.4CTAB提取液(pH8.0) 1 NY/T 2811—2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术规范 1 范围 本标准规定了橡胶树棒孢霉落叶病病原菌（Corynesporacassiicola）的术语和定义、检测方法、结果 判定、样品保存等技术要求。 本标准适用于橡胶树的棒孢霉落叶病病原菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 橡胶树棒跑霉落叶病corynespora leaf falldisease of rubber tree 由多主棒孢[Corynesporacassicola（Berk。etCurt.）Wei引起的-种为害橡胶树叶片和嫩梢 的真菌病害。该病害病原菌的学名、形态特征及其危害症状参见附录A。 4检测方法 4.1原理 根据橡胶树棒孢霉落叶病病原菌核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）特有碱基序列设计特异 性引物进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期272bp的DNA片段，判断样品中是否携带橡胶树棒孢 霉落叶病病原菌。 4.2仪器 显微镜（10×40倍）、高压灭菌锅、高速冷冻离心机（最大离心力25000×g）、PCR扩增仪、电泳仪及 紫外凝胶成像仪等。 4.3试剂及配制方法 4. 3. 11 mol/ L Tris - HCI(pH 8. 0) 称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris，优级纯）溶解于800mL一级超纯水中，用盐酸（HCl,分析 纯）调pH至8.0,加超纯水定容至1000mL。分装后高温灭菌(121℃)20min，4℃或室温保存备用。 4. 3. 210 mol/L NaOH 称取80.0g氢氧化钠（NaOH，分析纯）溶解于160mL一级超纯水中，溶解后再加一级超纯水定容 到200mL。 4. 3. 3 1 mol/L EDTA - Na (pH 8. 0) 称取372.2g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2，优级纯），溶解于70mL级超纯水中，再加人适量 NaOH溶液（4.3.2），加热至完全溶解后，冷却至室温，再用NaOH溶液（4.3.2)调pH至8.0，加超纯水 定容至100mL。分装后高温灭菌（121℃）20min，4℃或室温保存备用。 4.3.4CTAB提取液(pH8.0) 1 NY/T 2811—2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术规范 1 范围 本标准规定了橡胶树棒孢霉落叶病病原菌（Corynesporacassiicola）的术语和定义、检测方法、结果 判定、样品保存等技术要求。 本标准适用于橡胶树的棒孢霉落叶病病原菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 橡胶树棒跑霉落叶病corynespora leaf falldisease of rubber tree 由多主棒孢[Corynesporacassicola（Berk。etCurt.）Wei引起的-种为害橡胶树叶片和嫩梢 的真菌病害。该病害病原菌的学名、形态特征及其危害症状参见附录A。 4检测方法 4.1原理 根据橡胶树棒孢霉落叶病病原菌核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）特有碱基序列设计特异 性引物进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期272bp的DNA片段，判断样品中是否携带橡胶树棒孢 霉落叶病病原菌。 4.2仪器 显微镜（10×40倍）、高压灭菌锅、高速冷冻离心机（最大离心力25000×g）、PCR扩增仪、电泳仪及 紫外凝胶成像仪等。 4.3试剂及配制方法 4. 3. 11 mol/ L Tris - HCI(pH 8. 0) 称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris，优级纯）溶解于800mL一级超纯水中，用盐酸（HCl,分析 纯）调pH至8.0,加超纯水定容至1000mL。分装后高温灭菌(121℃)20min，4℃或室温保存备用。 4. 3. 210 mol/L NaOH 称取80.0g氢氧化钠（NaOH，分析纯）溶解于160mL一级超纯水中，溶解后再加一级超纯水定容 到200mL。 4. 3. 3 1 mol/L EDTA - Na (pH 8. 0) 称取372.2g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2，优级纯），溶解于70mL级超纯水中，再加人适量 NaOH溶液（4.3.2），加热至完全溶解后，冷却至室温，再用NaOH溶液（4.3.2)调pH至8.0，加超纯水 定容至100mL。分装后高温灭菌（121℃）20min，4℃或室温保存备用。 4.3.4CTAB提取液(pH8.0) 1 NY/T 2811—2015 橡胶树棒孢霉落叶病病原菌分子检测技术规范 1 范围 本标准规定了橡胶树棒孢霉落叶病病原菌（Corynesporacassiicola）的术语和定义、检测方法、结果 判定、样品保存等技术要求。 本标准适用于橡胶树的棒孢霉落叶病病原菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 橡胶树棒跑霉落叶病corynespora leaf falldisease of rubber tree 由多主棒孢[Corynesporacassicola（Berk。etCurt.）Wei引起的-种为害橡胶树叶片和嫩梢 的真菌病害。该病害病原菌的学名、形态特征及其危害症状参见附录A。 4检测方法 4.1原理 根据橡胶树棒孢霉落叶病病原菌核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）特有碱基序列设计特异 性引物进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期272bp的DNA片段，判断样品中是否携带橡