ICS 67.180.10 B 47 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2821—2015 蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定 液相色谱一串联质谱法 Determination of caffeic acid phenethyl ester in propolis- Liquid chromatography tandem mass spectrometry 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2821—2015 前言 本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：农业部农产品及转基因产品质量安全监督检验测试中心（杭州）、杭州蜂之语蜂业 股份有限公司。 本标准主要起草人：钱鸣蓉、王强、章虎、周萍、吴俐勤、王祥云、汪建妹、章征天。 行业标准信息服务平台 I NY/T2821—2015 蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定 液相色谱一串联质谱法 1 范围 本标准规定了蜂胶中咖啡酸苯乙酯的液相色谱一串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂胶乙醇提取物及蜂胶胶囊中咖啡酸苯乙酯的测定。 本标准方法最低检出限为3mg/kg，定量限为10mg/kg 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用甲醇溶解，超声波提取蜂胶中的咖啡酸苯乙酯，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2稀释液：甲醇十水=80+20。 4.3咖啡酸苯乙酯标准物质：纯度≥97%。 4.4咖啡酸苯乙酯标准储备溶液：准确称取咖啡酸苯乙酯标准物质，用甲醇配制质量浓度为1000 mg/L的溶液，一18℃冰箱中保存，有效期为12个月。 4.5咖啡酸苯乙酯标准中间溶液：吸取适量咖啡酸苯乙酯标准储备溶液（4.4），用甲醇稀释配制质量浓 度为1mg/L的溶液，0℃～4℃保存，有效期为1个月。 4.6咖啡酸苯乙酯标准工作溶液：将标准中间溶液（4.5)用稀释液（4.2)稀释成0.0002mg/L、0.001 mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.20mg/L和0.50mg/L多个质量浓度的标准工作溶液，绘制标准工 准信息服务平台 作曲线。 4.7滤膜：有机.0.22μm（g25mm）。 4.8聚丙烯离心管：50mL。 5仪器 5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2粉碎机。 5.3分析天平：感量0.0001g。 5.4超声波清洗器。 5.5高速离心机：转速不低于7000r/min。 6分析步骤 6.1试样的制备 1 NY/T2821—2015 蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定 液相色谱一串联质谱法 1 范围 本标准规定了蜂胶中咖啡酸苯乙酯的液相色谱一串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂胶乙醇提取物及蜂胶胶囊中咖啡酸苯乙酯的测定。 本标准方法最低检出限为3mg/kg，定量限为10mg/kg 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用甲醇溶解，超声波提取蜂胶中的咖啡酸苯乙酯，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2稀释液：甲醇十水=80+20。 4.3咖啡酸苯乙酯标准物质：纯度≥97%。 4.4咖啡酸苯乙酯标准储备溶液：准确称取咖啡酸苯乙酯标准物质，用甲醇配制质量浓度为1000 mg/L的溶液，一18℃冰箱中保存，有效期为12个月。 4.5咖啡酸苯乙酯标准中间溶液：吸取适量咖啡酸苯乙酯标准储备溶液（4.4），用甲醇稀释配制质量浓 度为1mg/L的溶液，0℃～4℃保存，有效期为1个月。 4.6咖啡酸苯乙酯标准工作溶液：将标准中间溶液（4.5)用稀释液（4.2)稀释成0.0002mg/L、0.001 mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.20mg/L和0.50mg/L多个质量浓度的标准工作溶液，绘制标准工 准信息服务平台 作曲线。 4.7滤膜：有机.0.22μm（g25mm）。 4.8聚丙烯离心管：50mL。 5仪器 5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2粉碎机。 5.3分析天平：感量0.0001g。 5.4超声波清洗器。 5.5高速离心机：转速不低于7000r/min。 6分析步骤 6.1试样的制备 1 NY/T2821—2015 蜂胶中咖啡酸苯乙酯的测定 液相色谱一串联质谱法 1 范围 本标准规定了蜂胶中咖啡酸苯乙酯的液相色谱一串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂胶乙醇提取物及蜂胶胶囊中咖啡酸苯乙酯的测定。 本标准方法最低检出限为3mg/kg，定量限为10mg/kg 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 用甲醇溶解，超声波提取蜂胶中的咖啡酸苯乙酯，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2稀释液：甲醇十水=80+20。 4.3咖啡酸苯乙酯标准物质：纯度≥97%。 4.4咖啡酸苯乙酯标准储备溶液：准确称取咖啡酸苯乙酯标准物质，用甲醇配制质量浓度为1000 mg/L的溶液，一18℃冰箱中保存，有效期为12个月。 4.5咖啡酸苯乙酯标准中间溶液：吸取适量咖啡酸苯乙酯标准储备溶液（4.4），用甲醇稀释配制质量浓 度为1mg/L的溶液，0℃～4℃保存，有效期为1个月。 4.6咖啡酸苯乙酯标准工作溶液：将标准中间溶液（4.5)用稀释液（4.2)稀释成0.0002mg/L、0.001 mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.20mg/L和0.50mg/L多个质量浓度的标准工作溶液，绘制标准工 准信息服务平台 作曲线。 4.7滤膜：有机.0.22μm（g25mm）。 4.8聚丙烯离心管：50mL。 5仪器 5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2粉碎机。 5.3分析天平：感量0.0001g。 5.4超声波清洗器。 5.5高速离心机：转速不低于7000r/min。 6分析步骤 6.1试样的制备 1 NY/T2821—2015 附录A (资料性附录) 多反应监测(MRM)色谱图 A.1咖啡酸苯乙酯标样多反应监测(MRM)色谱图 见图A.1。 RT:0.0-8.0SM:9G RT:3.5 100 NL:1.47E4 06 m/z=134.50-135.50F:-c ESI sid=10.00SRMms2 Relative Abundance 80 283.000[134.999-135.001, 70 178.999-179.001JMS ICIS 60 5-std-10ppb 50 40 30 m/z283.1/135.0 20 10 100 ART:3.5 NL:1.28E4 m/z=178.50-179.50F:c 06 ESI sid=10.00 SRM ms2 80 70 178.999-179.001JMSICIS 60 5-std-10ppb m/z283.1/179.0 50 40 20 10 01 0 5 2 3 6 7 Time(min) 图A.1 质量浓度为0.01mg/L咖啡酸苯乙酯标样多反应监测(MRM)色谱图 A.2蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯的多反应监测(MRM）色谱图 信息服务平台 见图A.2。 NY/T2821—2015 RT:0.0-8.0SM:9G 100 RT:3.5 NL:6.87E3 m/z=134.50-135.50F:-c Relative Abundance ES1 sid=10.00SRMms2 283.000[134.999-135.001, m/z283.1/135.0 178.999-179.001JMS ICIS 50 12-sample 40 30 20 100 RT:3.5 06 NL:6.40E3 80 m/z=178.50-179.50F:c 70 ESI sid=10.00SRMms2 60 178.999-179.001JMSICIS 50 40 12-sample m/z283.1/179.0 20 10 0 1 2 3 4 5 6 Time(min) 图A.2 蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯的多反应监测(MRM)色谱图 行业标准信息服务平台 5