ICS 67.180.10 B 47 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2822—2015 蜂产品中砷和汞的形态分析 原子荧光法 Speciation determination of arsenic and mercury in bee products- Atomic fluorescence spectrometry 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015~12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2822—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口。 本标准起草单位：农业部农产品及转基因产品质量安全监督检验测试中心（杭州）。 本标准主要起草人：张永志、王钢军、叶雪珠、王强、徐丽红、王。 行业标准信息服务平台 I NY/T2822—2015 蜂产品中砷和汞的形态分析原子荧光法 1范围 本标准规定了采用原子荧光法测定蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆及其冻干粉中砷和汞形态的分析方法。 本标准适用于蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆及其冻于粉中无机砷（亚砷酸根与砷酸根的总和）、一甲基肿酸 (MMA）、二甲基肿酸（DMA)、无机汞、甲基汞和乙基汞的测定。 本标准的方法检出限：无机汞、甲基汞和乙基汞分别为2.0μg/kg、0.80uμg/kg和0.10ug/kg，无机 砷、一甲基肿酸、二甲基肿酸各为10 μg/kg。 本标准的方法定量限：无机汞、甲基汞和乙基汞分别为6.0ug/kg、2.40μg/kg和0.30ug/kg，无机 砷、一甲基肿酸、二甲基肿酸各为30 μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品中不同形态的砷或汞经过提取、净化，用液相色谱柱分离后，不同形态的砷经过氢化物反应用 原子荧光光谱仪检测；不同形态的汞与氧化剂混合经紫外灯照射在线消解后，形成离子态的汞，再与还 原剂作用生成原子态汞，用原子荧光光谱仪检测。通过保留时间和峰面积与标准溶液进行比较，外标法 定量。 4试剂与材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水,GB/T6682，—级。 标准信 4.2氨水。 4.3乙：色谱纯。 4.4甲醇：色谱纯。 4.510%甲酸溶液：吸取10mL甲酸于装有约70mL水的100mL容量瓶中，加水至100mL，摇匀。 4.67%盐酸溶液：吸取70mL盐酸于装有约700mL水的1000mL容量瓶中，加水至1000mL，摇匀。 4.710%盐酸溶液：吸取10mL盐酸于装有约70mL水的100mL容量瓶中，加水至100mL，摇匀。 4.8盐酸一硫脲一氯化钾溶液：称取1.0g硫脲、0.15g氯化钾于烧杯中，用10%盐酸溶液（4.7)溶解 后，转人100mL容量瓶中并定容、摇匀。 4.91%硝酸溶液：吸取1mL硝酸（优级纯）于装有约70mL水的烧杯中，转人100mL容量瓶中并定 容、摇匀。 4.100.1%二乙氨基二硫代甲酸钠溶液：称取0.1g二乙氨基二硫代甲酸钠（分析纯）于100mL烧杯 中，用少量水溶解后，转人100mL容量瓶中并定容、摇匀。 4.1110%乙睛溶液：吸取10mL乙（色谱纯）于装有少量水的烧杯中，转入100mL容量瓶中并定 容、摇匀。 1 NY/T2822—2015 4.1210%甲醇溶液：吸取10mL甲醇（色谱纯）于装有少量水的烧杯中，转人100mL容量瓶中并定 容、摇匀。 4.130.5%氢氧化钾溶液：称取5.0g氢氧化钾于烧杯中，加人少量水溶解后，转人1000ml容量瓶中 并定容、摇匀。 4.14还原剂：称取1.5g硼氢化钾溶于100ml.0.5%氢氧化钾溶液（4.13)中，混匀，现用现配。 4.15氧化剂：称取1.0g过硫酸钾溶于100mL0.5%氢氧化钾溶液（4.13)中，混匀。 4.16无机汞（Hg）标准储备液（100mg/L）：吸取5mL浓度为1000mg/L的有证标准溶液于50mL 容量瓶中，加入0.5mL盐酸后，定容、摇匀。 4.17甲基汞、乙基汞的混合标准储备液（100mg/L）：分别准确称取125.2mg和132.6mg的氯化甲 保存。 4.183种形态汞混合标准中间液（1.0mg/L)：准确吸取甲基汞、乙基汞的混合标准储备液（4.17)1.0 mL，无机汞（Hg²+）标准储备液（4.16）1.0mL，定容至100mL，现配现用。 4.193种形态汞混合标准工作液：吸取0、1.00mL、2.00ml,3.00mL、4.00mL、5.00mL3种形态汞 混合标准中间液（4.18），分别置于100mL容量瓶中，并定容摇匀，得到3种形态汞的质量浓度分别为： 0.10.0ng/mL20.0ng/mL.30.0ng/mL、40.0ng/mL.50.0ng/mL，过0.45μm滤膜，备用。 4.204种形态砷混合标准工作液：根据亚砷酸根（三价砷）、砷酸根（五价砷）、一甲基肿酸、二甲基肿酸 有证标准物质的标示浓度值，分别用1%的硝酸溶液（4.9）配制成浓度约为0、10.0ng/mL、20.0ng mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL的混合标准工作溶液，备用。 4.21乙腈乙酸铵一（L-半胱氨酸）溶液：称取2.5g乙酸铵（色谱纯）和0.5gL-半胱氨酸（含量 >98.5%）于100mL烧杯中，用少量水溶解后转人500mL容量瓶中，加入25mL乙（色谱纯），加水 至500mL。过0.45μm滤膜，再超声30min，去除气泡，备用。 4.2225mmol/L磷酸氢二铵溶液：称取1.65g磷酸氢二铵溶于500mL水中，用10%甲酸（4.5）调节 pH为5.8，过0.45μm滤膜，再超声30min，去除气泡，备用。 4.23滤膜：水相，0.45μm(Φ50mm、13mm) 4.24 注射针筒：10mL。 V 标准信 4.25行 微量注射器：250L。 4.26 氩气：纯度不低于99.99%。 5仪器 慧服务平台 5.1原子荧光形态分析仪（配备液相分离系统：高效液相色谱泵、进样装置以及紫外灯消解装置）。 5.2高速振荡混合器：转数不低于1000r/min。 5.3高速离心机：转数不低于8000r/min。 5.4涡旋混合仪。 5.5分析天平：感量0.0001g.0.001g。 5.6pH计：精度为0.01。 5.7超声波清洗器。 5.8烘箱。 6试样制备 6.1蜂蜜 2 NY/T2822—2015 取适量无结晶的样品，搅拌均匀。对于结晶的样品，在密闭的情况下，放置于不超过60℃的水浴中 溶解，称样前冷却至室温，搅拌均匀，室温保存。 6.2蜂王浆及冻干粉 将液体、浆状、粉状的样品充分混合均匀；将低温保存的固体样品进行粉碎磨细。试样于一20℃冰 箱中保存备用。 6.3蜂花粉 进行粉碎磨细，室温保存。 7分析步骤 7.1汞形态提取 7.1.1提取 蜂花粉和蜂王浆冻干粉称取0.2g~1.0g（精确到0.1mg）,蜂王浆和蜂蜜称取1.0g~2.0g（精确 到0.1mg），样品于10mL离心管中，加人2mL盐酸一硫脲一氯化钾溶液（4.8），在高速振荡混合器上 混旋提取15min，离心10min，上清液倒人10mL离心管中，剩余的残渣再用2ml10%盐酸+1%硫 脲+0.15%氯化钾溶液（4.8）提取1次，合并2次上清液，加入0.5mL氨水中和。定容到10mL，取适 量定容后的溶液离心10min，过0.45μm孔径滤膜，得到提取液，待测。 7.1.2净化 颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行测定，首先分别用4mL纯乙睛和4mL水将C18的 SPE小柱（填料为100mg）活化，然后用4mL0.1%二乙氨基二硫代甲酸钠溶液（4.10)改性，再用4mL 水冲洗，将3mL样品提取液通过C18的SPE小柱，然后用4mL水冲洗小柱，再用5mL10%乙睛溶液 （4.11)清洗，最后用3mL乙腈一乙酸铵一（L-半胱氨酸）溶液（4.21)分3次洗脱，合并收集洗脱液用于 测定。 7.2砷形态提取 7.2.1提取 蜂花粉和蜂王浆冻干粉称取0.2g~1.0g（精确到0.1mg),蜂王浆和蜂蜜称取2.0g~5.0g（精确 到0.1mg），置于10mL具塞玻璃比色管中，加人10mL1%硝酸溶液（4.9），于90℃烘箱中热浸提2h， 每0.5h振摇1min，浸提完毕，取出冷却至室温，补加硝酸溶液（4.9）转人塑料离心管中，离心15min， 取上层清液，经0.45um滤膜过滤，得到提取液，待测，颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行 测定。 7.2.2净化 先将C1s小柱（规格1.0mL)进行活化：用注射针筒抽取10mL的甲醇（4.4)通过滤膜和小柱，通过 的时候保持其流速（每秒2滴），再用10mL的水通过滤膜和小柱，通过的时候保持其流速（每秒2滴）， 最后用10mL左右的甲醇（4.4）通过滤膜和小柱，通过时保持其流速（每秒2滴）。 颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行测定，吸取5mL提取液通过滤膜和C18小柱（规格1.0 mL），弃去前3mL，收集流出液，用于测定。每净化完一个样品后依次以10mL甲醇（4.4）、15mL水冲 洗，可用于对下一个样品提取液的净化。 7.3液相色谱参考条件 7.3.1测汞形态的液相色谱参考条件 7.3.1.1色谱柱参数：Cl：色谱柱，150mmX4.6mm，5μm粒径或相当者。 7.3.1.2流