NY/T2856—2015 5.5.1.2抽排设备密封装置和内腔耐内压试验 用空压机连接到电机的试验孔，加压至0.2MPa，保持5min，检查是否有泄漏。 5.5.1.3电缆性能试验 电缆性能试验按照GB5013.2的规定进行。电缆线长度用钢卷尺测量3次，取算术平均值。 5.5.1.4安全性试验 按照GB10395.8的规定进行。 5.5.1.5绝缘电阻和电动机绕组冷态直流电阻的试验 按照GB/T12785的规定进行。 5.5.2燃油类性能试验 5.5.2.1启动性能试验 人力启动要求温度为5℃，非人力启动要求温度为一5℃，重复启动抽排设备3次，每次间隔2min， 启动试验按NY/T208—2006中4.2.5的规定进行。 5.5.2.2功率和燃料消耗率试验 按照GB/T6072.1的规定进行。 5.6扬程试验 试验介质为清水，按照GB/T12785的规定进行试验。机电类抽排设备通过三相调压器调整输入 电压为额定电压，燃油类抽排设备利用转速表调整至额定转速，利用压力表和流量计测得水流压力和流 量，用式（2）计算扬程。同样方法试验两次，两次试验结果数据的差在两次平均值的5%以下时，取平均 值为实测结果；否则应重新试验，直至达到上述要求为止。 +Z。+(9/3600A)2 8xd 2g 式中： ,H 清水扬程，单位为米(m)； P 表压力，单位为帕斯卡(Pa)； 水的密度，p=1000千克每立方米（kg/m²）； 重力加速度，g一9.8米每秒平方（m/s²）； Z。一—水池水面至压力表中心高，单位为米（m）； 清水流量，单位为立方米每小时（m/h）； qu A. 在测压处输水管截面积，单位为平方米（m²）。 5.7效率试验 在5.6试验过程中，记录机电类抽排设备的输入功率和燃油类抽排设备的燃油消耗量，分别用式 (3和式（4)计算效率。 服务平台 X100.. ：(3) 3600P 式中： 机电类抽排设备效率，单位为百分率（%）； 抽排设备输入功率，单位为瓦特（W）。 pXgXq.XHXt (4) 3600(G-G2)XH. 式中： 燃油类抽排设备效率，单位为百分率（%）； 测量时间，单位为秒(s)； t G—测量开始时燃油和设备总质量，单位为千克（kg)； 4 NY/T2837—2015 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准参考了世界动物卫生组织（OIE)制定的《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册》（2012版）。 本标准由农业部兽医局归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所 本标准主要起草人：周婷、王强、代平礼、吴艳艳、周玮、徐书法、王星、段俊明、黄智勇。 行业标准信息服务平台 I NY/T 2837—2015 蜜蜂瓦螨鉴定方法 1范围 本标准规定了蜜蜂主要体外寄生瓦螨鉴定方法。 本标准适用于蜜蜂瓦螨一一狄斯瓦螨（Varroadestructor）、雅氏瓦螨（V.jacobsoni）、林氏瓦螨 (V.rindereri)和恩氏瓦螨(V.underwoodi)的鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T1954蜜蜂螨病病原检查技术规范 SN/T 1684瓦螨病诊断方法 3试剂、材料和仪器 见附录A。 4瓦螨的分离方法 4.1碎屑分离法 4.1.1随机分离法 将包有铁纱网的薄铁板置于蜂箱底部，通常1d～2d内产生的碎屑中可见少量的瓦螨。 4.1.2药物分离法 按照NY/T1954的规定执行。 4.2封盖子分离法 用刀割去封盖子脾的房盖，再将温水喷淋巢脾，下面放置双层网筛，抖出巢房内的大幼虫或蜂蛹，使 蜜蜂大幼虫和蜂蛹留在上层粗网筛上（孔径2.2mm），而瓦螨落在下层细网筛中（孔径1mm）。 4.3成年蜜蜂糖粉或面粉分离法 将蜜蜂抖落于大漏斗内，利用500mL或1000mL容量的广口瓶收集大漏斗内的蜜蜂，约占瓶容量 的1/3。取10g80目的细糖粉或面粉倒入装有蜜蜂的广口瓶中，瓶口用3mm孔径铁纱网封严；将广口 瓶横置放于平面上来回滚动3min，使糖粉或面粉均匀黏附至每只蜜蜂体上。将广口瓶瓶口朝下剧烈振 荡，使糖粉或面粉及瓦螨振落于光滑白纸上，再分离收集掉落的瓦螨。 5瓦螨的鉴定方法 5.1形态学鉴定 利用体视解镜观察并记录瓦螨的大小、形状、背板颜色、胸板、生殖腹板、肛板、腹侧板和后足板形 状，刚毛对数和足等的形态特征。 5.2分子生物学鉴定 5.2.1样本采集 按照第4章的分离方法取得瓦螨，并将瓦螨浸于70%乙醇溶液中，一20℃保存。 1 NY/T2837—2015 5.2.2总DNA简易提取法 单个瓦螨用无菌水洗涤，吸水纸吸干表面；将瓦螨置于1.5mL离心管内，加入40μuL2×WLB缓冲 液（其中，蛋白酶K终浓度50μg/mL）后进行研磨，50℃孵育1h；100℃煮沸10min~15min，冷却至室 温，加人40uL超纯水，1000g离心5s备用。 5.2.3PCR扩增瓦螨mtDNA CO-I基因片段 5.2.3.1引物序列 上游引物：5'-GGAGGAGATCCAATTCTATATCAAC-3'； 下游引物：5'-CCTGTTATAATAGCAAATAC-3； 预期扩增产物为458bp。 5.2. 3.2PCR 扩增体系 PCR扩增体系总体积为 50 μL: 总DNA提取液 10 μL 上、下游引物 各1μL Taq酶 0.5μL 10Xbuffer 5 μL 10XdNTP(各2.5mmol/L) 1 μL 超纯水 31.5μL 5.2.3.3PCR程序 94℃ 5min 60 s 94℃ 50℃ 75 s X30个循环 72℃ 90 s 72℃ 5 min 4℃ 8 5.2.3.4PCR扩增产物凝胶电泳检测 1.2%琼脂糖凝胶配制方法见附录A.1.3;5μuL扩增产物加1μL上样缓冲液（6×DNALoading Buffer）,DNAMarkerI(0.05mgDNA/mL)用量4μL。120V，30min凝胶成像仪观察，并记录分析； 阳性PCR产物送测序公司进行序列测定。 5.2.4瓦螨mtDNACO-I基因限制性内切酶反应体系 信息服务平 5.2.4.1SacI限制性内切酶消化体系 Buffer L 2 μL Sac I 1 μL PCR产物 7 μL 超纯水 8 μL 37℃水浴2h,1.2%琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果，电泳及凝胶成像方法参见5.2.3.4 5.2.4.2XhoI限制性内切酶消化体系 Buffer H 2 μL Xho I 1 μL PCR产物 7 μL 超纯水 8 μL 37℃水浴2h，1.2%琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果，电泳及凝胶成像方法参见5.2.3.4。 2 NY/T2837—2015 6结果判定 6.1形态学鉴定 狄斯瓦螨形态学鉴定按照SN/T1684和NY/T1954（见图1）；雅氏瓦螨（体长平均1063.0μm， 宽1506.8μm）与狄斯瓦螨（体长平均1167.3μm，宽1708.9μm）形态相似，但前者比后者的体型偏小， 而且更接近圆形（见图1和图2）；林氏瓦螨（体长平均1180μm，宽1698μm）与狄斯瓦螨相似，胸板上的 刚毛和隙孔数目较少，气管长且弯曲度较大，须肢转节无刚毛，而其他3种瓦螨的相应部位均有一根刚 毛（见图1和图2）；恩氏瓦螨（体长平均746.6um，宽1167.6μm）明显小于其他3种瓦螨，体形较狄斯 瓦螨横宽；腹面和背面构造与狄斯瓦螨十分相似，区别为背板两侧靠后缘各具15根～19根向外放射的 粗长刚毛（见图1和图2）。 a）狄斯瓦螨前面观 b）狄斯瓦螨腹面观 （周婷仿Vandame） （吴艳艳仿Angeleri） c）林氏瓦螨腹面观 d）雅氏瓦螨腹面观 (引l自Guzman-andDelfinado-Baker) (引自GuzmanandDelfinado-Baker) e）恩氏瓦螨腹面观 (引自Delfinado-Baker） 图14种瓦螨雌螨形态示意图 3 NY/T2837—2015 b）雅氏瓦螨腹面观 雅氏瓦螨背面观 a) e）狄斯瓦螨背面观 d）狄斯瓦螨腹面观 f）恩氏瓦螨背面观 e）林氏瓦螨背面观 500μm 图24种瓦螨雌螨背面观或腹面观示意图 (引自Anderson andTrueman) 6.2分子生物学鉴定 6.2.1瓦螨mtDNACO-I基因酶切结果鉴定 在形态学初步判断出瓦螨类型。其中，分布在我国的狄斯瓦螨可根据酶切结果快速判定是否属于 附录B中所列的3种基因型（参见图B.1）。 6.2.2瓦螨mtDNACO-I基因核酸序列比对分析 PCR扩增产物若出现458bp特异性片段，将扩增产物进行测序，对此片段序列与已知瓦螨基因型 进行比较分析（参见表B.1)；若核酸序列与已知瓦螨基因型同源性为100%，可鉴定为相应瓦螨类型及 基因型；若与已知基因型有差异，则为瓦螨新基因型。 NY/T2837-2015 附录A （规范性附录） 试剂、材料和仪器 A.1试剂 A.1.1蜂群中分离瓦螨的试剂 主要为氟胺氰菊酯条和双甲溶液（有效成分0.05%）。 A.1.22×寄生虫裂解缓冲液(WLB) 1 mol/ L KCl 10 mL 1 mol/ L Tris 2 mL 2 mol/L MgCl2 0. 25 mL Tween 20 4.5mL 20%NP-40（乙基苯基聚乙二醇） 4.5mL 2 mL 1% 明胶 超纯水 76.75mL A.1.31.2%琼脂糖凝胶制备 琼脂糖1.2g与0.5XTBE