ICS65.100.30 B17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2888.1-2016 真菌微生物农药 木霉菌 第1部分：木霉菌母药 Fungal pesticides-Trichoderma spp. Part 1:Trichoderma spp. technical concentrates(TK) 行业标准信息服务平台 2016-10-01实施 2016-05-23发布 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2888.1—2016 前言 NY/T2882《真菌微生物农药 木霉菌》分为2部分： 第1部分：木霉菌母药； 第2部分：木霉菌可湿性粉剂。 本部分为NY/T2882的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所、上海交通大学。 本部分主要起草人：袁善奎、陈捷、姜辉、周欣欣、李雅乾、师丽红、翟唯钢、王以燕、王一喆。 行业标准信息服务平台 NY/T2888.1—2016 真菌微生物农药木霉菌 第1部分：木霉菌母药 1范围 本部分规定了真菌微生物农药木霉菌母药的要求、试验方法、标志、标签、包装、贮运及验收 本部分适用以棘孢木霉（Trichodermaasperellum）、哈茨木霉（Trichodermaharzianum）、深绿木 霉（Trichodermaatroviride）等木霉菌种为活性成分的粉状木霉菌母药。 注：上述3种木霉菌菌种有效成分描述参见附录A。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T191包装储运图示标志 GB/T1601农药pH值的测定方法 GB/T1604商品农药验收规则 GB/T1605商品农药采样方法 GB3796农药包装通则 GB/T81702008数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T30361 农药干燥减量的测定方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 木霉菌母药Trichoderma spp.technicalconcentrate（TK） 由木霉菌纯菌种经生物发酵生产而获得的高含量分生孢子或厚垣孢子粉，通常情况下还会包含伴 随发酵过程的少量生物组分和化学杂质。 3.2 菌落形成单位colonyformingunits(CFU) 将木霉菌母药用无菌水稀释后得到的菌液通过涂布的方法让其单个孢子分散在琼脂平板上，待培 养后每个孢子形成一个特定菌落，即一个菌落形成单位（CFU），通过肉眼观察菌落的数量来推算单位微 生物农药样品中的含孢量。 3. 3 含孢量sporecontent 每克木霉菌母药中所含的孢子数量，所含孢子数量包括分生孢子和厚垣孢子。 注：单位为菌落数每克（CFU/g）。 3.4 杂菌率microbial contaminant 木霉菌母药中除了木霉菌外，其他微生物（如真菌和细菌等）量占总菌量的百分率。 NY/T 2888.1—2016 4要求 4.1外观 经生物发酵生产而获得的高含量分生或厚垣孢子粉，一般为绿色粉状物，由于菌种或发酵基质的不 同颜色偶有差异，通常情况下还会包含伴随发酵过程的少量生物组分和化学杂质，但应为均匀疏松的粉 末，不可有团块。 4.2指标 木霉菌母药质量控制项目指标应符合表1要求。 表1木霉菌母药控制项目及指标 项 指 标 含孢量，CFU/g ≥20×108 ≤1.0 杂菌率，% 干燥减量，% <12.0 pH 6.0~8.0 5试验方法 5.1抽样 按照GB/T1605规定进行样品的采集，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量不少于 100g。采样时应特别注意避免样品污染，采样容器和工具应经过消毒灭菌，样品采集后应立即进行检 验，若不能立即检验，应于4℃条件下贮存。 5.2菌种鉴别 采用DNA条形码的标准基因进行检测，并可辅助形态学特征进行菌种鉴别，鉴别方法参见附录B。 5.3含孢量测定 采用平板菌落计数法，单位为CFU/g。 5.3.1 试剂和溶液 a) 脱氧胆酸钠（化学纯）； b) 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基： c) 蛋白陈营养琼脂（NA）培养基， d) 无菌水：121℃蒸汽灭菌30min，冷却后备用 信息服务平台 5. 3. 2 主要仪器、设备 a) 培养Ⅲl：直径90mm，高16mm~17mm； b) 分析天平：精度为0.001g； c) 移液器； d) 高压蒸汽灭菌器； e) 超净工作台； f) 恒温振荡器； g) 恒温培养箱（控温范围0℃~50℃，控温误差士2℃）； 恒温水浴锅； h) 生物显微镜：X1000倍。 i) 5.3.3试验步骤 5.3.3.1样品的准备 在无菌操作条件下，将样品搅拌均匀，准确称取1.00g样品，溶入100mL的无菌水中浸泡30min 2 NY/T2888.1—2016 后，振荡30min，得到稀释100倍的样品溶液，标记为1号。然后参照表2（以稀释6次为例）进行梯度 稀释。 表2梯度稀释示例 编号 2 3 4 5 6 7 灭菌水体积，mL 100.0 99.0 99.0 9.0 9.0 9.0 9.0 加入上一稀释浓度溶液的体积，mL 1.0 1. 0 1.0 1.0 1.0 1.0 累计稀释倍数 102 104 10 107 108 10% 1010 5.3.3.2试验方法 采用平板菌落计数法。在无菌条件下，将上述各梯度稀释液分别吸取0.1mL于0.05%脱氧胆酸 钠PDA平板上，用曲玻棒均匀涂布在整个平板表面，每个稀释度做3次重复，然后置于25℃下培养36h 后，选择适宜的稀释度，取菌落数在30个～200个的平板进行计数。 5.3.3.3计算 的平均值，将平均值乘以相应的稀释倍数，再乘以10，作为每克母药中的菌落数，按式（1） 计算。 N=[ai+a2+a3)/3]xbx10 (1) 式中： 单位样品（g）中的菌落数，单位为菌落数每克（CFU/g）； 第1个重复的调查平板数； ai 第2个重复的调查平板数； a2 第3个重复的调查平板数； a3 稀释倍数。 6 如第6号稀释度3个平板的菌落数（CFU）分别为79、80、81，则该母药的含孢量为： N=［（79+80+81)/3]×10×10=8.0X101l（CFU/g) b） 如有两个连续稀释度的平板菌落数均在适宜计数范围之内，则按式（2）计算。 N=ZC/ [(1Xn+0. 1Xn2)Xd] (2) 式中： Zc 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； 第1个适宜稀释度的调查平板数； ni n2 一第2个适宜稀释度的调查平板数： p 第1个适宜计数的稀释度。 5.4杂菌率的测定 5.4.1试验方法 按5.3的方法进行测定，选择NA培养基检测样品中的细菌杂菌，选择PDA培养基检测样品中的 真菌和卵菌杂菌，然后统计总的可见杂菌菌落数量，杂菌率按式（3）计算。 Ni+N2 X 100 ... 式中： X 杂菌率，单位为百分率（%）； N.- 细菌杂菌菌落数的总和，单位为菌落数（CFU）； N2 真菌和卵菌杂菌菌落数的总和，单位为菌落数（CFU）； N3 木霉菌菌落数总和，单位为菌落数（CFU）。 3 NY/T2888.1—2016 5.4.2允许差 两次平行测定结果相对差，应不大于5%。 5.5pH的测定 按GB/T1601中pH计法进行测定。 5.6干燥减量的测定 按GB/T30361中规定的农药干燥减量法进行测定。 6产品检验与验收 应符合GB/T1604的规定。极限值的处理应按照GB/T81702008中4.3.3的规定进行 7 标志、标签、包装、购运 7.1标志、标签 产品的标志、标签应符合GB3796的规定，同时注明贮运条件。 7.2包装 包装应符合GB3796和GB/T191的规定 7.3贮运 木霉菌母药包装应贮存在通风、干燥的库房中，贮运时严防日晒及35℃以上高温，置于阴凉干燥 处，否则木霉菌活孢子活性降低。运输时，注意轻放，防止破损，不得与杀菌类以及其他有毒有害物质混 装、混运。 7.4安全 在使用说明书或包装标签上应注明毒性、防护措施等。 7.5验收期 验收期为1个月。从交货之日起，在1个月内完成产品的质量验收，其各项指标均应符合标准 要求。 行业标准信息服务平台 NY/T2888.1—2016 附录A （资料性附录） 有效成分描述 A.1有效成分概述 A.1.1中文通用名称：木霉属种名十菌株编号。 A.1.2拉丁学名：Trichoderma+.。 A.1.3分类地位：真菌（Fungi）真菌门（Eumycota）半知菌亚门（Deuteromycotina）丝孢纲（Hyphomy cetes）丝孢目（Hyphomycetales）丛梗孢科（Moniliaceae）木霉属（Trichoderma）。 A.1.4形态学特征：本标准以最常见的3种木霉属种的形态学特征为例，介绍不同种之间木霉菌菌 丝、孢子等的不同，并作为菌种鉴别的依据。 A.2有效成分分类描述 A.2.1棘孢木霉Trichodermaasperellum A.2.1.1分生孢子：孢子球形或亚球形或卵圆形，仅在中部稍稍加粗，大小为（11.7um～6.0um）× （3.0μm5.0μm）；分生孢子簇棉絮状，长宽比1.0~1.4；分生孢子聚合体为深绿色。厚垣孢子顶生， 偶尔间生，亚球形至卵圆形，光滑，淡绿色，直径为6.2μm～11.5μm。如图A.1。