ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3002—2016 饲料中动物源性成分检测 显微镜法 Analysis for the determination of constituents of animal origin in feed- Microscopymethod 行业标准信息服务平台 2016-11-01发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3002—2016 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：中国农业大学。 本标准主要起草人：刘贤、杨增玲、韩鲁佳、陈龙健、黄光群、肖卫华、姜训鹏、吕程序。 行业标准信息服务平台 NY/T3002—2016 饲料中动物源性成分检测 显微镜法 1范围 本标准规定了饲料中动物源性成分的显微镜检测方法。 本标准适用于饲料原料以及畜禽饲料中陆生动物肉骨粉和鱼粉的显微镜定性检测。 本标准方法的检出限为0.1%（W/W 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件 件。凡是不注日期的弓 用文件 文件 GB/T 603 化 研用制 制品的 GB/T 6003 GB/T6682 门水规格 分 和试验 GB/T14699 采样 动物高 GB/T 20 试样的制 AL 原理 基于骨、 软骨 物手发以 骨和鱼鳞等典型的 显微镜 特征，对饲料原料 CH 和畜禽饲料 4试剂及制剂 除另有说明。 所用式 符合GB 用制剂制备应符合 水的 GB/T603的 4.1浓缩剂 Ri 四氯乙烯 4.2 染色剂 茜素红溶液：取 mL水中稀释添） 红至该溶液。 4.3封固剂 4.3.1丙三醇。 4.3.2石蜡。 4.3.3紫外固化光学胶 4.4染色封固剂 4.4.1斐林溶液：称取6.9g五水合硫酸铜溶于100mL水中，制备溶液A；分别称取34.6g四水合酒石酸 钾钠和12g氢氧化钠溶于100mL水中，制备溶液B。使用前，取溶液A和溶液B按1:1(V/V)混合。 4.4.2胱氨酸溶液：分别称取2g醋酸铅和10g氢氧化钠，溶于100mL水中。 4.5清洗剂 4.5.1乙醇：≥95%。 4.5.2丙酮。 4.6漂白剂 NY/T3002—2016 次氯酸钠溶液：8%~14%有效氯。 5仪器和设备 5.1分析天平：感量为0.001g和0.01g。 5.2样品磨或研钵。 5.3试验筛：筛孔尺寸1mm、500μm和250μm，试验筛应符合GB/T6003.1的要求。 5.4锥形玻璃分液漏斗：容积250mL，聚四氟乙烯或磨砂玻璃活塞，活塞开口直径应≥4mm 5.5生物显微镜：放大100倍～400倍，明场透射光。 5.6实验室常用玻璃器血。 5.7 玻片：平板载玻片、单凹载玻片和盖玻片（20mm×20mm）。 5.8# 实验室用镊子、探针。 5.9 紫外灯：波长范围350nm~380nm。 5.10电热板（50℃）或酒精灯。 5.11涡旋混合器。 5.12 电热干燥箱。 6采样与试样制备 6.1采样 按GB/T14699.1规定的方法采样。 6.2试样制备 为避免交叉污染，所有重复使用的设备使用前应仔细清洁。分液漏斗应拆分清洗，先人工预清洗 后清洗机清洗。试验筛应使用硬纤维刷进行清理。筛分鱼粉等含高脂质成分样品的试验筛，宜采用丙 酮和气枪进行清理。 6.2.1样品干燥 水分含量>14%的样品，处理前应使用电热干燥箱进行干燥［（103土2)℃]。 6.2.2样品预筛分 为避免物流等环节可能造成的交叉污染，对于颗粒饲料和谷粒，宜采用1mm试验筛进行预筛分， 筛上物和筛下物宜作为独立样品进行后续制备和分析。 6.2.3分样与粉碎 按GB/T20195规定的方法，抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样不少于50g。粉碎过1mm 试验筛，混匀备用。 6.2.4沉淀物的提取与制备 准确称取10g试样（鱼粉、其他纯动物源性产品、矿物成分或沉淀物比例高于10%的预混料应称取3 g），精确至0.01g，置于分液漏斗中，加人50mL四氯乙烯，连续振荡混合至少30s，再量取不少于50mL四 氯乙烯，连续沿分液漏斗内壁倒人彻底洗净着壁试样，静置5min，打开活塞，分离沉淀物于滤纸过滤后风干。 准确称量风干后沉淀物（精确至0.001g），统一过500μm试验筛。若筛上物>5%应采用250um 试验筛进行筛分。筛上物和筛下物两部分均应进行分析。 注：上述操作应在通风柜内进行。 6.2.5悬浮物的提取与制备 倒置分液漏斗，将提取沉淀物后剩余的悬浮物从分液漏斗倒人表面血，风干后收集并准确称重（精 确至0.001g），统一过500um试验筛。若筛上物>5%，应采用250um试验筛进行筛分，筛上物和筛下 2 NY/T3002—2016 物两部分均应进行分析。 注：上述操作应在通风柜内进行。 6.3试样染色处理与玻片制备 6.3.1沉淀物染色 采用茜素红溶液进行染色，具体染色步骤如下： a）将制备的沉淀物移至玻璃试管中，加入5mL乙醇清洗，涡旋混合30s后，静置1.5min，倒出 上清液，再加人5mL乙醇，重复操作1次。 b）加人1mL次氯酸钠溶液，沉淀物脱色反应持续10min。加满水，静置2min~3min，倒出上 清液。 c）加人茜素红溶液2滴～10滴，涡旋混合。反应30s后，加入5mL乙醇清洗，涡旋混合30s，静 置1min，倒出上清液，再加入5mL乙醇，重复操作1次；加入5mL丙酮清洗，涡旋混合30s， 静置1min，倒出上清液。 d）置染色后的沉淀物于电热干燥箱干燥（60℃，2h）。 经染色处理，沉淀物中的动物骨、软骨组成呈红色， 6.3.2沉淀物玻片制备 依检测需要，选择经染色处理的沉淀物制备玻片。若样品经过筛分，则筛上物和筛下物均制备玻 片，>250um的沉淀物使用单凹载玻片，<250μm的沉淀物使用平板载玻片。 玻片制备数量应满足执行7.1分析流程的要求。 6.3.2.1非永久性玻片 取清洁载玻片置于台面，加5滴7滴丙三醇（避免产生气泡），取约10mg沉淀物分散其中浸透 用探针搅拌使分散均匀，加盖玻片，用石蜡密封。 6.3.2.2永久性玻片 取清洁载玻片置于台面，加5滴～7滴紫外固化光学胶（避免产生气泡），取约10mg沉淀物分散其 中浸透，用探针搅拌分散均匀，及时加盖玻片（1min内完成），移置紫外灯下照射至少2min。 6.3.3悬浮物染色与玻片制备 6.3.3.1肌纤维 采用斐林溶液进行染色。取清洁载玻片置于台面，加适量斐林溶液，取少量悬浮物分散其中浸透， 用探针搅拌分散均匀，加盖玻片。为免褪色影响使用，宜尽快使用为佳。 经斐林溶液染色处理，肌纤维呈淡粉紫色。 6.3.3.2羽毛和动物毛发 采用胱氨酸溶液进行染色。取清洁载玻片置于台面，加适量胱氨酸溶液，取少量悬浮物分散其中浸 透，用探针搅拌分散均匀，加盖玻片，静置反应至明显变色。可通过使用电热板（50℃）或酒精灯加热玻 片（避免沸腾）加快染色反应 经胱氨酸溶液染色处理，羽毛和动物毛发呈深棕色。 7显微镜观察 7.1分析流程 应严格按规定流程进行显微镜观察分析。饲料原料以及畜禽饲料中动物源性成分镜检分析流程如 图1所示，鱼粉中陆生动物源性成分的镜检分析流程如图2所示。 每个镜检玻片均应使用不同放大倍数观察。 镜检分析流程中每个步骤规定的镜检玻片数量应严格遵守。每个分析流程最多观察6个玻片。 依据附录A动物源性成分典型图谱对显微镜观察结果进行判定。 3 NY/T 3002—2016 是 95%样品粒径≤500μm 250μm筛分 3个沉淀物玻片（<250μm） 3个沉淀物玻片 +1个悬浮物玻片（<250μm） +1个悬浮物玻片 按8.3给出鱼粉成分 按7.2.2重复 分析结果 分析 检出5个以上动 是 检出5个以上动 物源性成分颗粒 物源性成分颗粒 鱼粉成分颗粒 香 香 1个沉淀物玻片 1个沉淀物玻片（>250μm） 动物源性成 是 检出5个以上动 检出5个以上动 分颗粒形态 物源性成分颗粒 物源性成分颗粒 丫香 陆生动物 1个悬浮物玻片（>250μm） 1个悬浮物玻片 陆生动物源性 是 检出动物源 是 成分颗粒数 检出动物源 ≤5 性成分颗粒 性成分颗粒 按8.3给出陆生动物 按7.2.2重复 源性成分分析结果 分析 否 秀 按8.1给出分析结果 图1 饲料原料以及畜禽饲料中动物源性成分分析流程图 是 杏 95%样品粒径≤500μm 250μm筛分 3个沉淀物玻片 3个沉淀物玻片（<250μm） 是 检出5个以上陆生 检出5个以上陆生 动物源性成分颗粒 动物源性成分颗粒 香 按8.3给出分析结果 2个沉淀物玻片（>250μm） 2个沉淀物玻片 检出5个以上陆生 是 陆生动物源 检出5个以上陆生 动物源性成分颗粒 动物源性成分颗粒 性成分颗粒数 5 1个悬浮物玻片 1个悬浮物玻片（>250μm） 按7.2.2重复分析 检出陆生动物 是 是 检出陆生动物 源性成分颗粒 源性成分颗粒 香 否 按8.1给出分析结果 图2 鱼粉中陆生动物源性成分分析流程图 NY/T3002—2016 7.2重复分析次数 7.2.1如果按上述分析流程未检出动物源性成分，无需重复分析，应按8.1规定给出分析结果。 7.2.2如果按上述分析流程检出的动物源性成分颗粒数量为1个～5个，应按6.2.3重新分样与粉 碎，取50g进行重复分析。如果重复分析检出的动物源性成分颗粒数量为0个～5个，应按8.2给出分 析结果；否则，应按6.2.3再重新分样与粉碎，取50g再次进行重复分析。但是，如