ICS 65.020.30 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7228—2019 传染性肌坏死病诊断规程 Code of diagnosis for infectious myonecrosis (IMN) 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 SC/T7228—2019 台 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起章 1V 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站、深圳海关。 本标准主要起草人：万晓媛、杨冰、于力、黄健、余卫忠、史成银、张锋、宋晓玲、李清、张庆利、许华、李 晨、刘莉。 行业标准信息服务平台 SC/T7228—2019 传染性肌坏死病诊断规程 1范围 本标准给出了传染性肌坏死病（Infectiousmyonecrosis，IMN)诊断所需的试剂和材料、器材和设备、 临床症状，规定了采样、组织病理学检测、套式RT-PCR检测和综合判定。 本标准适用于对虾传染性肌坏死病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T28630.4—2012白斑综合征（WSD)诊断规程第4部分：组织病理学诊断 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp：碱基对（basepair) cDNA：互补脱氧核糖核酸（complementaryDNA） DEPC：焦碳酸二乙酯（diethypyrocarbonate） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid) dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate） EB：溴化乙啶(ethidiumbromide) EDTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid) IMN：传染性肌坏死病（infectiousmyonecrosis） IMNV：传染性肌坏死病毒（infectiousmyonecrosisvirus) LOS：淋巴器官球状体（lymphoidorganspheroids） M-MLV：莫洛尼鼠白血病病毒（moloney-murineleukeminvirus） PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction) PvNV：凡纳滨对虾野田村病毒（Penaeusvannameinodavirus） RNA：核糖核酸（ribonucleicacid） RT-PCR：逆转录-聚合酶链式反应（reversetranscription-polymerasechainreaction) Taq：水生栖热菌（Thermusaquaticus） 务平台 Tris：三羟甲基氨基甲烷（tris hydroxymethyl aminomethane） 4试剂和材料 4.1除非另有说明，标准中使用的水为蒸馏水、去离子水或相当纯度的水。 4.2二甲苯：分析纯。 4.3中性树胶。 4.4戴维森氏AFA(Davidson'sAFA)固定液按附录A中A.1的规定执行。 4.5苏木精染色液按附录A.2的规定执行。 4.61%伊红储存液按附录A.3的规定执行。 4.71%焰红储存液按附录A.4的规定执行。 4.8伊红-焰红染色液按附录A.5的规定执行。 1 SC/T7228—2019 4. 9 黏片剂按附录A.6的规定执行。 4. 10 95%乙醇：分析纯。 4. 11 85%乙醇按附录A.7的规定执行。 4. 12 80%乙醇按附录A.8的规定执行。 4. 13 75%乙醇按附录A.9的规定执行。 4. 14 50%乙醇按附录A.10的规定执行。 4. 15 组织病理学检测阳性对照为受IMNV感染且显示明显病理变化的对虾肌组织切片。 4.16 组织病理学检测阴性对照为未受IMNT 的正常对虾肌组织切片。 4. 17 DEPC水按附录A.11的规定执行或商品化试剂 TRIzoITM总RNA提取试剂，或其他等效产品 4.18 4. 19 氯仿：分析纯。 4.20 异丙醇：分析纯 4. 21 无水乙醇：分 4. 22 无RNA酶的 的规定执行 4.23 RNA酶拉 (RNSi RN 4.24 M-MLI 车 4. 25 5XM 逆转录 缓冲液 4.26 NTP 物 20℃保存，用 于逆转录。 4. 27 dNTP 物，一20℃保存， 用于PCR。 4.28 10XP CEN 4. 29 MgCl2 mtrg! 4.30 Taq D 4.31 套式RT 外侧号 4.32 套式RT- AA-GT-3。 A-3'。 4.33 套式RT-POR C 4.34 引物 GT-CTT-G-3'。 套式RT-PCR 内侧 imol G 套式RT-PCR检测阳性对照 4.35 态式RT-PCI 果显示阳性的对虾组织样 品，一70℃保存。 支务平台 4.36 品，一70℃保存。 4.37套式RT-PCR检测空白对照为DEPC水。 4.38 50X电泳缓冲液按附录A.13的规定执行。 4.39 1X电泳缓冲液按附录A.14的规定执行。 4. 40 ：6X载样缓冲液。 4.41 琼脂糖。 4.42 DNA分子量标准。 4.43 10mg/mLEB储存液按附录A.15的规定执行，或其他等效产品。 器材和设备 5.1切片机。 2