ICS 65. 020. 99 B 20 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 674-2003 转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化 Detection of genetically modified plant organisms and derived productsDNA extraction and purification 行业标准信息服务平台 2003-04-01发布 2003-05-15实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 6742003 前 言 本标准由农业部科技教育司提出。 本标准起草单位：中国农业科学院生物技术所、中国农业科学院植物保护研究所、上海市农业科学 院、农业部科技发展中心、中国农业大学。 本标准主要起草人：贾士荣、金芜军、张大兵、彭于发、黄昆仑、李宁、汪其怀、罗云波。 本标准首次发布。 行业标准信息服务平 NY/T 674—2003 转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化 1范围 本标准规定了转基因植物及其产品中DNA提取和纯化的方法和技术要求。 本标准适用于转基因植物及其产品中DNA的提取和纯化。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求 NY/T673转基因植物及其产品检测抽样 3原理 通过物理和化学方法使DNA从样品的不同组分中分离出来。利用不同的纯化方法，弃除样品中 的蛋白质、脂肪、多糖及其他次生代谢物，及DNA提取过程中加入的三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙醇和 乙酸钠等，获得纯化的DNA。 4试剂与溶液 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂；配制好的溶液经高温灭菌后使用。 4.1 溴代十六烷基三甲胺(cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)。 4.2三羟甲基氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane，Tris]。 4. 3.二水乙二胺四乙酸二钠(ethylenediamine tetraacetic acid,disodium salt,dihydrate,EDTA-Na · 2H20)。 4.4 E-巯基乙醇(E-mercaptoethanol)。 4.5三氯甲烷(chloroform）。 4.6异戊醇(isoamyl alcohol)。 4.7 异丙醇(isopropyl alcohol)。 4.8三氯甲烷十异戊醇=24十1（体积比）。 4.976%乙醇溶液：取760mL无水乙醇，加水定容至1L。 70%乙醇溶液：取700mL无水乙醇，加水定容至1L。 4.10 4.11 化钠，摇动容器使溶质完全溶解，然后加入50mL1mol/LTris-HCl(pH8.0)[在800mL去离子水中溶 解121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）,冷却至室温后用浓盐酸调节溶液的pH值至8.0(约需42mL浓 盐酸）,加水定容至1L，分装后高压灭菌］,20mL0.5mol/LEDTA（pH8.0)[在800mL水中加人 186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H,O)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用氢氧化钠（NaOH) 1