ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3540—2020 油菜种子产地检疫规程 Plant quarantine rules for rape seeds in producing areas 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3540—2020 言 国农 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起章 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准主要起草单位：全国农业技术推广服务中心、青海省农业技术推广总站。 本标准主要起草人：秦萌、李新苗、冯晓东、张宇卫、黄霞、徐元宁、王桂兰、姜培、李洪明。 I NY/T3540—2020 油菜种子产地检疫规程 1范围 本文件规定了油菜种子产地检疫的程序和方法。 本文件适用于农业植物检疫机构对油菜种子实施产地检疫。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 GB/T31793 3 目标检疫性有害生物 十字花科黑斑 病菌 Preudo monas aMec 经病菌(酒 菜茎基溃病菌） (pasm 十字花科蔬 maculan . &. De Not. 黑 菌pla 十字花科根 smodiophorbrassic foron 目标检疫收 善生物用 间症状参见附录A RA 繁种地检疫要习 4.1 从未发生可 生本规程所列日标检疫性有害生物 4.2 周围有符 金疫要求 的隔离屏障，周边工000 内未种 4.3水源无检疫 有害 物水系相对独立 邻近 4. 4 不使用病田 秆派制 5 种子检疫要求 R 5.1选用无病健康科 植物检疫证书或产地检疫合格证：国 子应有国(境)外引 进农业种苗检疫审批 5.2播种前3d~5d,对种子进行 药剂处理 5.3收获的种子应单收、 单储 6产地检疫实施 6.1产地检疫受理 油菜种子繁育单位或个人播种前一个月向当地农业植物检疫机构提交农业植物产地检疫申请书和相 关材料，当地农业植物检疫机构审核材料真实性和完整性。 6.2田间调查 6.2.1调查时期 幼苗期、蕾墓期、花期、成熟期分别进行1次田间调查，必要时可增加调查次数。 6.2.2调查方法 原原种繁育田应逐行、逐株调查检验。 原种、良种繁种田可采用棋盘式抽样检验。面积<1hm²取5点，面积1.1hm²～10.0hm²取8点， 面积10.1hm²~20.0hm²取11点，面积20.1hm²~33.3hm²取15点，面积>33.3hm²取20点以上。 每点取样≥20株。 1 NY/T3540—2020 6.2.3调查记录 田间调查应填写农业植物检疫田间调查记录表（见附录B)。 6.3室内检测 田间调查不能确认的带病植株样本送室内做检测（参见附录C)，检测结果填写农业植物检疫实验室 检测报告单（见附录D）。 7检疫处理 经田间调查或室内检测发现目标检疫性有害生物的，当地农业植物检疫机构责令生产单位或个人实 施检疫处理，拔除和销毁病株，其生产的种子不得作种用。 8签发证书 经产地检疫合格的，当地农业植物检疫机构签发产地检疫合格证。 9档案管理 产地检疫的原始调查数据、表格、标本、图像等资料档案应保存3年以上。 NY/T3540—2020 附录A （资料性附录） 目标检疫性有害生物田间症状 A.1十字花科黑斑病菌 可危害植株叶、茎、花梗、角果和根部。 危害叶片时，初发老叶多，后延及新叶。病斑初期在叶片背面，形状不规则，水浸状或油浸状绿色至淡 褐色小斑点，直径约1mm。小斑点增多融合后形成大的不整齐的坏死斑，边缘紫褐色，大小3mm～ 4mm，后变为具有光泽的褐色或黑褐色不规则形或多边形病斑，薄纸状，不突破叶脉，叶片正面病斑初起 为与叶背对应的位置出现青色斑块，后变为淡褐、黑褐色焦枯状。 危害叶脉时，致使叶片生长变缓，叶面皱缩，开始老叶发生多，后波及新叶；发病严重时，全株叶片表现 为白色灼状斑块，叶脉变褐，叶片变黄脱落或扭曲变形，只剩叶梗和主叶脉，后变为淡褐色焦枯状，导致 植株枯黄而死亡。 危害茎及花梗时，病斑呈椭圆形至线形，水渍状，褐色或黑褐色，有光泽，斑点部分凹陷。 危害角果时，角果上产生圆形或不规则形黑褐色斑，偶成条斑，稍凹陷。 危害根部时，根基部初生暗色病斑，后变深，渐成黑色，呈不规则圆形斑纹。 A.2十字花科蔬菜黑胫病菌 病菌对幼苗和成株都引起危害，主要症状是叶部损坏、变色，茎部溃疡。受害的茎、叶上有灰色斑点， 茎基部有凹陷的溃疡斑，上有黑色小点，根部病斑长条形，易腐朽。发病严重时，茎溃疡环绕茎基部导致茎 部变弱、植株倒伏，甚至死亡。 A.3十字花科根肿病菌 幼苗时感染病菌，肿大部位主要出现在植株主根。肿瘤有多种形状，一般有纺锤形、圆筒形、手指形 等，肿瘤表面多数光滑。病株矮小，叶片颜色比较淡，下部叶片周围变成黄色，且出现脱水迹象。 成株时期感染，则肿瘤主要出现在侧根上及主根的下半部。病株主根肿瘤较大，但非常少，侧根肿瘤 较小，但数量多，早期的肿瘤表面光滑，到后期会出现裂痕、表面变得粗糙，最后植株根部发生腐烂，造成组 织腐烂，散发臭气致整株死亡。 3 NY/T3540—2020 附录B （规范性附录） 农业植物检疫田间调查记录表 农业植物检疫田间调查记录表见表B.1。 表B.1农业植物检疫田间调查记录表 编号： 受检 名 称 PUBL 单位 (个人) 联系人 植物名称 品种名称 种苗检疫证明编 调查面积 调查地点 目标有害生 调查方 调查结论 备注 当事人 （签名） 检疫员 日 （签名） NY/T3540—2020 附录C (资料性附录） 油菜检疫性有害生物实验室检测方法 C.1十字花科黑斑病菌 C.1.1形态特征 菌体短杆状或链状，两端圆形，无芽孢，具1根5根极生鞭毛，大小（0.8～0.9）um×（1.5～2.5） um，革兰氏染色阴性，好气性。在肉汁陈琼脂平面上菌落光滑有光泽，白色至灰白色，边缘初圆形光滑，质 地均匀，后具皱褶。在肉汁陈培养液中呈云雾状，没有菌膜。在琼脂培养基上产生蓝绿色荧光。在0℃～ 32℃均可生长，以24℃～25℃最适，最低0℃，致死温度50℃/10min；酸碱度适应范围为pH6.1～8.8，最 适为pH7。病原菌具有丁香假单胞菌种的特征，此外，还能产生果聚糖，对氨青霉素敏感。 C.1.2显微镜检验 清洗病株样本，除去表面的尘土，后用灭菌的解部刀在病健交界处取一小块褐变组织，悬浮于少量灭 菌水中，盖上盖玻片，在低倍显微镜下观察，看有无喷菌现象或细菌溢出，如有，就是细菌性病害。然后可 用接种环蘸取悬浮液在NA平板（加青霉素酶）上划线分离培养，根据十字花科黑斑病菌的菌落特征选择 菌落鉴定。 C.1.3血清学检测 利用十字花科黑斑病菌的抗血清来检测病菌，通常采用ELISA的检测方法，具有快速、简便的 优点。 C.1.4PCR扩增检测 用特异引物（上游引物：5'-TGCCAGCCGTATAAGTACCC-3'，下游引物：5'-CGGTATACCCAAT GGCAATC-3')扩增待测细菌特定DNA片段。 C.2十字花科蔬菜黑胫病菌 C.2.1形态特征 该病菌在培养基上菌落边缘不整齐、有结节状颗粒点，气生菌丝白色、多而密，分枝较多，有分隔。分 生孢子器直径150μum～225μm，球形至扁球形，褐色至深黑褐色，散生、埋生或半埋生于菌丝中，有空口1 个～2个，部分分生孢子器从孔口处溢出浅粉红色胶质状黏液。分生孢子无色透明，椭圆形至纺锤形，两 端常见各1个油球，孢子大小（3.3～6.1)μm×（1.4～2.4)μm。该病菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)上不产生黄色或黄褐色色素。 C.2.2鉴定方法 鉴定方法按照GB/T31793的规定执行。 C..3十字花科根肿病菌 C.3.1形态特征 油菜根肿病的休眠孢子看似球形，表面有乳形突起，孢壁也有不同程度的突起。其直径为2.1um～ 4.5μm，平均直径约3.6μm。 C.3.2光学显微镜检查 肿瘤标本用自来水冲洗干净，室温下晾干。然后用刀片对肿瘤的不同部位进行徒手切片，切好之后将 切片放在滴有地衣红染色剂的载玻片上，加盖玻片，去掉气泡，放在光学显微镜下观察，根据显微镜下的标 尺，得到作物根肿菌的休眠孢子形态大小。进行拍照记录。 5