ICS 65.020.01 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 35392020 叶螨抗药性监测技术规程 Technical code of practice for acaricide resistance monitoring of spidermites 2020-03-20发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3539—2020 平言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院蔬菜花卉研究所、河南省植保植检站 本标准主要起草人：张帅、王少丽、张友军、吴青君、闵红。 I NY/T3539—2020 叶螨抗药性监测技术规程 1范围 本标准规定了琼脂保湿浸叶法监测叶螨抗药性的方法。 本标准适用于截形叶螨Tetranychus truncatusEhara和二斑叶螨TetranychusurticaeKoch等叶螨 对杀螨剂的抗药性监测。 2规范性引用文件 ·仅注日期的版本适用于本文件。 和试验方 3术语及定义 RESEA 下列术语和 S 3. 1 琼脂保湿浸叶汤 leaf dipping method 将浸过药 液的叶碟放 于底部平铺有琼脂的直径3. 5m的塑料培养 主物通过接触和取食 RCH 生物测 带毒叶片而进 行 定方法 U 4试剂与材料 4.1生物试材 靶标生物：截形 叶蝴 供试植物：未被 药剂污染 haseolus oulga 4.2试验药剂 GRI 杀螨剂原药。 4.3化学试剂 人 曲拉通X-100（或吐温-80），化学纯：内酮或其他有机溶剂：分析纯永为符 GB/T6682中规定的一 级水；琼脂粉。 5 仪器设备 5.1 电子天平（感量0.1mg）。 5.2打孔器（Φ2.5cm）。 5.3塑料培养皿（@3.5cm）。 5.4微波炉。 5.5塑料移液管5mL)。 5.6毛笔(零号)。 5.7体视显微镜。 5.8人工气候箱。 5.9昆虫针。 5.10酒精灯。 NY/T3539—2020 5.11塑料培养血盖（昆虫针扎孔处理）。 6试验步骤 6.1试虫采集与饲养 按随机抽样原则，在田间采集叶螨，在室内人工气候箱温度（26土1)℃、相对湿度（60士5)%、光照周期 16h：8h(L：D)内不接触任何药剂的情况下连续饲养1代～2代用于测定。待测叶螨采用无虫菜豆苗 进行海绵水隔离台法饲养技术。 6.2琼脂培养基的制作 用三角瓶配制0.1%的琼脂200mL～300mL，用微波炉充分融化，取出后用塑料移液管吸取5mL 左右的液体琼脂，加人塑料培养血底部，冷却凝固后待用。 6.3药剂溶解与配制 通过预试验确定药剂的梯度浓度范围。准确称取一定量的原药（精确到0.1mg），用少量丙酮（或其 他有机溶剂)溶解，按要求配制成一定浓度的母液。用移液器吸取适量母液，用含0.1%曲拉通X-100或 0.1%吐温-80的水溶液按照等比梯度稀释成5个～7个系列浓度的药液。每个质量浓度药液量不宜少 于250mL。 6.4处理方法 琼脂保湿浸叶法：用打孔器将新鲜、洁净、无农药污染的菜豆叶片打成直径2.5cm的叶碟，注意避开 叶脉部位。将昆虫针在酒精灯外焰上加热后，快速在塑料培养血上盖扎孔20个～30个待用。将叶碟浸 于待测药液中，10s后取出晾干至叶片表面无游离水，之后将晾干的叶片叶背向上平铺于塑料皿琼脂上。 按浓度从低到高的顺序重复上述操作，每处理不少于4次重复，并设不含药剂的0.1%曲拉通X-100或 0.1%吐温-80水溶液浸渍的叶片作为空白对照。用零号毛笔挑取生理状态一致的健康雌成螨25头～30 头于每个叶碟上，然后盖上带孔的塑料培养皿盖，转移至温度（26士1）℃、相对湿度（60士5）%、光照周期 16h：8h（L：D)的人工气候箱中饲养和观察。 6.5结果检查 药剂处理24h后检查测试叶螨的死亡情况，记录每一重复对应的总螨数和死亡数。用毛笔轻触虫 体，试虫仅有1只足动或完全不动者视为死亡。 7 数据统计与分析 7.13 死亡率计算方法 根据检查数据，按式（1)和式（2)计算各处理的校正死亡率。 K X100 (1) 式中： P,——死亡率，单位为百分号（%)； K—表示每处理浓度总死亡虫数，单位为头； N——表示每处理浓度总虫数，单位为头。 计算结果均保留至小数点后2位。 P,-Po X100 式中： P2——校正死亡率，单位为百分号（%； P,一处理死亡率，单位为百分号（%； P。一一对照死亡率，单位为百分号（%）。 计算结果均保留至小数点后2位。 2 NY/T3539—2020 若对照死亡率<5%，无需校正；若对照死亡率在5%～20%，应按式（2)进行校正；对照死亡率> 20%，试验需重做。 7.2回归方程和致死中浓度(LCso)计算方法 采用PoloPlus、Probit等软件的概率值分析法，求出每种供试药剂的LCso值及其95%置信限、斜率(b 值)及其标准误。 8抗性水平的计算与评估 8.1叶螨对部分杀螨剂的敏感性基线 参见附录A。 8.2抗性倍数的计算 根据敏感品系的LCso值和测试种群的LCso值，按式（3)计算测试种群的抗性倍数。 RR = T S 式中： RR 测试种群的抗性倍数； T 测试种群的LCs值，单位为毫克每升（mg/L）； s 敏感品系的LCso值，单位为毫克每升（mg/L）。 8.3抗性水平的评估 根据抗性倍数的计算结果，按照表1中抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。 表1抗性水平的分级标准 抗药性水平分级 抗性倍数(RR)，倍 低水平抗性 5.0<RR≤10.0 中等水平抗性 10.0<RR≤100.0 高水平抗性 RR>100.0 3 NY/T3539—2020 附录A (资料性附录） 叶螨对部分杀螨剂的敏感性基线 A.1 截形叶螨雌成螨对部分杀螨剂的敏感性基线 见表A.1。 表A.1 截形叶螨（Tetranychus truncatus Ehara）雌成螨对部分杀螨剂的敏感性基线 药剂名称 （95%置信限），mg/L 阿维菌素 02(0.01~0.03) 联苯肼酯 2.52~7.33) 哒螨灵 18~31.09) 虫螨睛 CO ~0.31) 丁氟蝴 3.21±0.38 56 ~5. 07) 腈吡螨酯 .17 0. 24) 联苯菊酯 S 24 .72) 乙唑螨睛 04) 乙基多杀商 素 (60 1502.8 丙溴磷 A 12) 注：截形叶虫翡种 年采自山东临沂蔬菜田 在室 内不接触任何药剂的情况下用菜 至今所建立的 相对敏感品 A.2 二斑叶螨雌成螨对部分杀螨剂的敏感性基线 见表A.2 表A 基线 药剂名称 斜率土标准误 .(95% R 限),mg/L 阿维菌 5±0% 055/ ~0.93) 联苯肼酯 1~13.99) 哒螨灵 90~8.30) 虫螨腈 (0.50~1.02) 丁氟螨酯 03± 47(0.34~0.68) 腈吡螨酯 0. 0.60 (0.48~0.78) 联苯菊酯 1.88±0.29 9.00(6.00~12.00) 乙唑螨腈 1.44±0.23 0.25(0.19~0.35) 乙基多杀菌素 0.96±0.14 38.36(27.45~57.94) 丙溴磷 1.37±0.17 65.41 (51.03~87.48) 注1：二斑叶螨种群于2009年采自山东泰安苹果树，在室内不接触任何药剂的情况下用菜豆叶片继代饲养至今所建立 的相对敏感品系。 注2：二斑叶螨雌成螨对联苯菊酯敏感基线数据引自Tsagkarakou等的结果；二斑叶螨雌成螨对哒螨灵敏感基线数据引 自Iias等的结果， NY/T3539—2020 参考文献 [1JTsagkarakou A,Van Leeuwen T,Khajehali J,et al, 2009. Identification of pyrethroid resistance associated mutations in the para sodium channel of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae(Acari: Tetranychidae)[JJ. Insect Molecular Biology,18(5);583-593. [2JIlias A,Roditakis E,Grispou M,et al,2012. Efficacy of ketoenols on insecticide resistant field populations of two-spotted spider mite Tetranychus urticae and sweet potato whitefly Bemisia tabaci from Greece[JJ.Crop protection(42):305- 311. 5