ICS65.020.20 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3533—2020 小麦孢囊线虫鉴定和 监测技术规程 Technical code of practice for identification and monitor of wheat cyst nematode 2020-03-20 发布 2020-07-01实施 中华人民共和国农业农村部 、发布 NY/T3533—2020 信 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起章。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。 本标准起草人：彭德良、彭焕、黄文坤、孔令安。 I NY/T3533—2020 小麦孢囊线虫鉴定和监测技术规程 1范围 本标准规定了小麦孢囊线虫鉴定和监测的术语和定义、试剂和设备、鉴定方法、监测方法、调查记录。 本标准适用于小麦禾谷孢囊线虫（Heteroderaavenae）和菲利普孢囊线虫（H.filipjeui）的鉴定及监测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 件 SN/T1848植物有 害生 SN/T2757 FAND 3术语和定义 2/57 SN/T1848 N 定的以及 列术语和定 文件 S 3. 1 小麦孢囊线虫 wheat cystnematode 可危害小麦 麦黑 能麦及多种 ，我国有 线虫和菲利普孢囊 线虫两种，参见附录 TUR 3. 2 孢囊 cys 孢囊类线虫发 育过程 ICU 4试剂和设备 4.1 主要试剂 燕糖、高岭土、甘 4.2主要设备 人 4.2.1标准网筛：孔径 4. 2. 2 生物显微镜：40倍 000倍。 4. 2. 3 体视显微镜：10倍 5 鉴定方法 5.1 样品采集 小麦等植株出现黄化、矮化，根系侧根丛生等症状，抽穗期根部出现白色雌虫，采集根系和根围土壤样 品进行室内鉴定。危害症状参见附录A。 5.2形态学鉴定 5.2.1二龄幼虫和孢囊分离 分离样品中的二龄幼虫和孢囊。分离方法参见附录B。 5.2.2标本制作 按SN/T1848规定的方法制作。 5.2.3显微镜观察 在显微镜下观察孢囊、二龄幼虫、雌虫和雄虫的形态特征，拍照。 NY/T3533—2020 5.2.4形态学鉴别特征 5.2.4.1禾谷孢囊线虫 孢囊：柠檬形，颈较长。阴门锥突出，膜孔为双膜孔，近圆形，有泡状突，无下桥。 雄虫：线形，体环清楚，侧线4条，两端钝，口针基部球圆形。 二龄幼虫：线形，体环清楚，侧线4条。唇区较高，前端圆，缢缩较明显，口针强壮，基球大，前缘平或稍 凹。尾圆锥形，透明尾较长。 5.2.4.2菲利普孢囊线虫 孢囊：柠檬形，阴门锥突出，膜孔为双膜孔，近马蹄形，泡状突发育良好，有下桥。 雄虫：唇区具有4个头环，突出。口针强壮，基球大。侧线4条。尾短平滑， 二龄幼虫：唇部缢缩，2个微弱的头环。口针强壮，基球大。侧线4条。尾稍钝。 5.2.4.3禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫形态差异 2种线虫形态相似，主要区别见表1。具体描述参见附录A。 表1禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫主要形态差异 种名 阴门膜孔 泡状突 阴门裂 下桥 禾谷孢囊线虫 双膜孔，近圆形 发达，黑棕色，数量多，形状各异 12μm~13μm 无下桥 菲利普孢囊线虫 双膜孔，似马蹄形 较弱或中度发达，数量少，呈明显球形7μm～11μm 下桥发育良好 5.2.5结果判定 按照5.2.4的规定判定。 6监测方法 6.1系统调查 6.1.1调查点设定 选择发病的小麦地块2块～3块，每块666.7m²，作为系统调查固定观察点。 6.1.2孢囊及卵量调查 在小麦播种前或小麦收割后，采用Z形采样法，取5cm～20cm的根际土壤，每块采集25个点，将所 取土样充分混合后，取1kg左右装入样品袋，注明采样时间、地点等，室内摊开自然风干。称取200g风 干土样，宜采用简易漂浮法（参见附录B中B.2)分离土壤中孢囊，在体视显微镜下计数。随机挑取、挤破 10个孢囊，制备卵悬浮液，计算每克土样中的卵量，调查结果记人附录C中的表C.1。 6.1.3发育进度调查 冬麦区，小麦出苗后，冬前每15d调查1次，翌春返青期、拔节期和扬花期各调查1次。春麦区，苗 期、拔节期和扬花期各调查1次。每次挖取10株小麦，将所采麦苗的根剪下后漂洗干净，采用酸性品红法 染色，方法参见附录D。在体视显微镜下观察根内线虫的发育进度，结果记入表C.2。 6.1.4白雌虫调查 6.1.4.1调查方法 小麦扬花一灌浆期采用5点取样法。每点10株，计数单株白雌虫数。 6.1.4.2严重度分级 根据小麦抽穗扬花期根部白雌虫的数目，将小麦孢囊线虫病发生程度分为5级。 0级：无孢囊，无病； 1级：极轻微感染（每株白雌虫1个～5个）； 2级：轻微感染（每株白雌虫6个～20个）； 3级：中度感染（每株白雌虫20个40个）； 4级：严重感染（每株白雌虫40个以上）。 2 NY/T3533—2020 6.1.4.3病情指数 病情指数按式（1)计算。 Z(d: Xli) : X100 (1) PXD 式中： I 病情指数； d; 严重度级值； li 各级病株数，单位为株； P 调查总株数，单位为株； D 严重度最高级别值。 6.1.4.4结果记录 记人表C.3。 6.2大田普查 6.2.1普查时间 小麦扬花一灌 浆 6.2.2普查方法 根据不同区 域 同的种 同由块类型选择调查田每种类型田调查数 10. 块，调查总田块 不少于20块。 大田白雌虫普 法同6.1 1 调查记录 详细记录 3 NY/T3533—2020 附录A (资料性附录） 小麦孢囊线虫危害症状和形态学特征 A.1危害症状 小麦孢囊线虫病的田间症状表现为：受侵染的小麦植株瘦小，叶片泛黄发白，无光泽；底部叶片边缘发 黄，叶脉淡绿，严重者萎焉死亡；分较少或不分，麦苗稀疏；与植物缺肥、缺水等营养不良的症状十分相 近。同时，受侵染的植株，根部组织严重损伤，主根严重退化，侧根增多，从而加剧了缺水、缺肥等营养不良 症状。受侵染的小麦根部侧根丛生，通常呈“乱麻状”或“钢丝球”状。在小麦的抽穗期和扬花期根系上清 晰可见白色孢囊。 A.2形态学特征 A.2.1禾谷孢囊线虫 A.2.1.1测量数据 雌虫：体长550μm~770μm，体宽360μm~500μm 雄虫：体长1070μm~1590μm，体长/体宽为32~55，体长/食道处体宽为7~12，体长/食道至食道 腺的距离为5.5~6.8,尾长40μm~50μm，口针27μm~31μm,引带33μm~38μm。 二龄幼虫：体长520μm~610μm，体宽20μm~24μm，尾长45μm~70μm，口针24μm~28μm。 A.2.1.2形态描述 雌虫：柠檬形，颈部和阴门锥明显。唇区有 环纹，6个唇瓣会合，有1个唇盘；口针直或略呈 弓形，口针基球圆。中食道球圆形且有明显的瓣 门。阴门裂12um～13um，阴门处有胶质状的 挤压物，但挤压时很少有卵。角质表面有锯齿形 的皱缩的纹饰。亚晶层明显，在孢囊呈暗绿色时 脱去。阴门锥大部分被无色透明的阴道结构占 满；泡状突明显且聚集在阴门锥下，双膜孔，膜孔 呈近圆形。 孢囊：平均大小为710μm×500μm。成熟 孢囊由白色变为褐色时不经历黄色阶段。 雄虫：蠕虫形。体环纹明显，侧区有4条侧 线。唇区圆，缢缩，有4条6条环纹（通常5 条）。头架深度骨化，有明显的外缘。头小体不 明显，位于唇区后前部1个～2个体环及后部6 个～7个体环处。口针前部的锥体部分迅速变 尖，通常短于口针长度的一半。口针基球圆形， 通常有1个平的向后倾斜的前表面；背食道腺开 说明： A孢囊； E- 雄虫尾部； 口在口针基球后3μm～6μm处。中食道球 3 一阴门锥； 二龄幼虫头部； 圆形，具明显瓣门。食道覆盖肠的腹侧和侧腹； C- 一雄虫头部； G,H 二龄幼虫尾部。 排泄孔在食道与肠连接处附近。半月体明显，2 一雄虫食道腺； 个～3个体环长。通常位于排泄孔前5个～6个 注：引自WilliamsandSiddiqi1972 体环处，但有时仅在其前1个～2个体环处。半 图A.1禾谷孢囊线虫形态特征 4 NY/T3533—2020 月小体不明显，在排泄孔后6个～7个体环处。交合刺弓形，腹面有一中等大小的凸缘和一具缺刻的末 端，两者形成一长的窄管。引带简单，稍弯曲。尾末端通常卷曲。 二龄幼虫：蠕虫形，尾端聚尖。唇区圆，缢缩，有2条～4条环纹。体环明显。侧区宽约为体宽的1/4， 侧线4条，外侧带网形纹。口针发达，口针基球大，其前部扁平或凹陷；前部锥体不到口针长度的一半。中 食道球圆，肌肉质发达，具有一大的瓣门。尾长为肛门处体宽的3倍～4.5倍；透明尾长35μm～45μm或 约为1.5个口针长。侧尾腺孔形明显，恰好位于肛门后。 A.2.2菲利普孢囊线虫 A.2.2.1测量数据 雌虫：体长490μm~830μm，体宽340μm~620μm。 雄虫：体长1160μm~1400um，体长/体宽为37~46.2，体长/食道处体宽为8.3~9.5，尾长40μm~ 50μm，口针长26.6μm~28.7μm，引带长28μm~34μm。 二龄幼虫：体长341μm~581μm，体宽21μm~25μm，尾长49μm~63μm，口针长21.7μm~30.8μm。 A.2.2.2形态描述 孢囊：成熟的孢囊呈柠檬状，阴门锥突出，表面具有白色的亚晶层，外壳有乙形纹，浅棕色变为亮 棕色，透过表皮能看到内部的卵，双膜孔，膜孔为马蹄形，有下桥和发育良好的泡状突，白色至中棕