ICS 67.140.20 B 35 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3514—2019 咖啡中绿原酸类化合物的测定 高效液相色谱法 Determination of chlorogenic acids in coffee- High performance liquid chromatography 2019-12-27发布 2020-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3514—2019 前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所、农业农村部农产品质量监督检验测 试中心（昆明)、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（昆明）。 本标准主要起草人：邵金良、黎其万、刘兴勇、林涛、王丽、刘宏程、汪禄祥、陈兴连、樊建麟。 一 NY/T3514—2019 咖啡中绿原酸类化合物的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了咖啡中6种绿原酸类化合物的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于咖啡中5-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、4-咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰 奎宁酸和3，5-二咖啡酰奎宁酸等单个或多 个组分含量的测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件 应用 凡是不注日期的引用文 GB/T 6682 分 析实 NY/T1518 袋装生咖啡 RES 3原理 咖啡中的 效液机 保留时间定性、 外标法定量。 RAL 4试剂和材 除另有说明 外，水为 CB/T6682规定的 4.1试剂 4.1.1甲醇 4.1.2磷酸（ 4.1.3磷酸溶 酸（4 4.1.4磷酸-甲醇 洗酸 1)20mL，混匀。 4.2标准品 4.2.15-咖啡酰奎宁 906- 4.2. 2 绿原酸（C16H180 CAS号32 4. 2. 3 4-咖啡酰奎宁酸（C Og,CAS 4.2. 4 3,4-二咖啡酰奎宁酸（C 12，CAS号：14534-61-3）：纯 4.2.5 4,5-二咖啡酰奎宁酸（C25H24O 4.2.63,5-二咖啡酰奎宁酸（C25H24O12，CAS号：2450-53-5）：纯度≥99%。 4.3标准溶液 4.3.1单一绿原酸类化合物标准储备溶液：分别准确称取5-咖啡酰奎宁酸20mg、绿原酸80mg、4-咖啡 酰奎宁酸20mg、3，4-二咖啡酰奎宁酸5mg、4,5-二咖啡酰奎宁酸5mg和3，5-二咖啡酰奎宁酸5mg（精 确至0.0001g)于10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为 2000mg/L、8000mg/L、2000mg/L、500mg/L、500mg/L和500mg/L的单一绿原酸类化合物标准储 备溶液，一18℃以下避光储存，有效期一个月。 4.3.2绿原酸类化合物混合标准中间溶液：分别准确吸取1.0mL单一绿原酸类化合物标准储备溶液 （4.3.1)于10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)稀释至刻度，配制成绿原酸类化合物混合标准 中间溶液。一18℃以下避光储存，有效期一周。 1 NY/T3514—2019 0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL至10mL棕色容量瓶中，用磷酸-甲醇溶液（4.1.4)定容 至刻度，配制成绿原酸类化合物系列混合标准工作溶液。现用现配。 4.4滤膜：0.45μm，水相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2天平：感量0.01mg和0.001g。 5.3咖啡磨：适用于磨碎焙炒的咖啡豆。 5.4嵌齿轮磨：装有冷却套；或者分析磨、装有刀片和冷却套；或者其他适于磨碎生咖啡豆的磨。 5.5样品筛：60目。 5.6恒温水浴锅。 6分析步骤 6.1取样 取样按NY/T1518的规定执行。 6.2样品制备与保存 用5.3或5.4所规定的设备研磨，直至试样通过60目的样品筛为止。混匀，装入密闭容器中，样品于 室温下保存。 6.3试样处理 称取试样0.5g（精确至0.001g）于200mL烧杯中，加入80mL磷酸溶液（4.1.3），沸水浴30min，不 时振摇。取出冷却至室温，转移至100mL容量瓶中，用磷酸溶液（4.1.3)定容至刻度，摇匀，静置。过 0.45μum水相滤膜（4.4)，待测。 6.4仪器参考条件 6.4.1高效液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Cl8柱（250mmX4.6mm，5μm）或相当者； b) 流动相：磷酸溶液（4.1.3）和甲醇，梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1； c) 流速：1.0mL/min； d) 检测波长：327nm； e) 柱温：30℃； f) 进样量：10μL。 表1梯度洗脱程序 时间，min 磷酸溶液，% 甲醇，% 0.00~10.00 06 10 10.01~12.00 80 20 12.01~30.00 80 20 30.01~32.00 90 10 32.01~36.00 06 10 6. 4. 2 色谱测定 准确吸取制备液（6.3)10μL，注入高效液相色谱仪，并用绿原酸类化合物系列混合标准工作溶液 （4.3.3)制作标准曲线，进行色谱测定。绿原酸类化合物混合标准溶液色谱图参见附录A。 7结果计算与表达 试样中被测绿原酸化合物以质量分数计，按式（1)计算。 2 NY/T3514—2019 pxv (1) mX10000 式中： 试样中待测绿原酸化合物的含量，单位为百分号（%）； 试样溶液中待测绿原酸的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V. 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； m- -试样质量，单位为克（g）； 计算结果保留3位有效数字。 8 重复性 在重复性条件下，获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9 检出限和定量限 本方法的检出限：5-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和 3，5-二咖啡酰奎宁酸为1.2mg/kg，绿原酸为0.70mg/kg。 本方法的定量限：5-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸和 3,5-二咖啡酰奎宁酸为4.0mg/kg，绿原酸为2.0mg/kg。 3 NY/T3514—2019 附录A （资料性附录） 绿原酸类化合物混合标准溶液色谱图 绿原酸类化合物混合标准溶液色谱图见图A.1。 紫外吸收强度，AU 0.070 0.060 0.050 十 0.040 0.030 0.020 0.010 0.000 0.00 35.00 t,min 说明： 1 5 g/L) L; ng 2- 咖啡酰 3- 咖啡配 奎宁胶 mg/L)。 图 NY/T 3514—2019 中华人民共和国场 农业衍业标准 咖啡中绿原酸类化合物的测定 高效液相色谱法 NY/T3514—2019 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * ￥ 开本880mm×1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2020年3月第1版 2020年3月北京第1次印刷 书号：16109·8041 定价：18.00元 版权专有侵权必究 NY/T3514—2019 举报电话：（010）59194261