ICS 67.100.10 X 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3513—2019 生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法 Determination of thiocyanate in raw milk-Ion chromatography 2019-12-27发布 2020-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3513—2019 前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室 （北京）、农业农村部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）。 本标准主要起草人：文芳、叶巧燕、郑楠、李松励、王加启。 I NY/T3513—2019 生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法 1 范围 本标准规定了生乳中硫氰酸根测定的离子色谱法 本标准适用于牛、羊、水牛、特牛等不同奶畜生乳中硫氰酸根的测定。 本标准的检出限为0.25mg/kg，定量限为0.75mg/kg 2规范性引用文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样用乙腈沉淀蛋以,上 液加水调市 并经反相固相萃取租净化后 谱分 离，电导检测器检 测。以保留时间定性 生，外 新量 AL 4试剂或材料 用分析纯试剂。 4.1水,GB/ 6682 4. 2 2乙睛（CHC N.色谱纯 4.3甲醇(CH H): 4.4丙酮(CH。 4.550%氢氧化钅 4.6离子色谱淋洗液 根据 及色谱柱选择和配制不同的淋洗液体 4.6.1氢氧根系淋洗液鱼仪 4.6.1.1氢氧化钾淋 液自动电解发生器在线生成，浓度为15 ~60mmol/L。 4.6.1.2氢氧化钠淋洗液（45mmol取2.34ml50%氢氧化钠溶液（4 用水稀释至1000mL，可 通人氮气保护，以减缓碱性淋洗液吸收空气中的CO而失效，缓慢摇匀，室温下可放置7d。 4.6.1.3氢氧化钠淋洗液（60 mo 1/L）：取3.12mL50%氢氧化钠溶液（4.5），用水稀释至1000mL，可 通人氮气保护，以减缓碱性淋洗液吸收空 气中的CO，而失效，缓慢摇匀，室温下可放置7d。 4.6.2碳酸盐系淋洗液（NazCO浓度为5mmol/） ，NaHCO浓度为2mmol/L，丙酮浓度为5%）：准确 称取0.5300g碳酸钠和0.1680g碳酸氢钠，分别溶于适量水中，转移至1000mL容量瓶，加入50mL 丙酮，用水稀释定容，混匀。 4.7硫酸溶液（45mmol/L)：移取2.45mL浓硫酸，加人适量水中，并用水定容至1000mL，混匀。 4.8硫氰酸根标准储备溶液（1000mg/L)：将硫氰酸钠（NaSCN,CAS号：540-72-7，纯度≥99.99%）于 80℃烘箱内烘干2h。准确称取干燥后的硫氰酸钠0.1397g，用水定容至100mL，混匀。0℃～4℃保存， 有效期为6个月。 4.9硫氰酸根标准中间溶液（10mg/L）：准确吸取1mL硫氰酸根标准储备液（4.8），用水稀释至100 mL，混匀。0℃～4℃保存，有效期为1个月。 4.10硫氰酸根标准系列溶液：分别准确移取硫氰酸根标准中间溶液（4.9)0μL、10μL、20μL、50μL、 1 NY/T 3513—2019 100μL、500μL和1000μL，用水定容至10mL混匀，得到浓度分别为0mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05 mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L和1.00mg/L的硫氰酸根标准工作液。0℃～4℃保存，有效期为1个月。 5仪器设备 5.1离子色谱仪：配抑制器电导检测器。 5.2高速冷冻离心机：8000r/min，4℃。 5.3天平：感量为0.1mg、0.01g。 5.4涡旋混匀器。 5.5移液器：100μL、1mL。 5.6烘箱：(80±5)℃。 5.7过滤器：水系，0.22μm。 5.8 反相净化小柱,如 OnGuard I RP 柱"(1. 0 mL),或性能相当者。 6样品 采集的有代表性生乳样品可用硬质玻璃瓶或聚乙烯瓶盛放，样品采集后应尽快分析。若样品 在0℃～6℃冷藏保存，冷藏时间不应超过48h;若不能及时测定，应于一20℃冷冻保存，冷冻时间不应超 过30d，解冻温度不应超过60℃，解冻次数不应超过5次。冷藏、冷冻的样品需恢复至室温并摇匀，待测。 7 试验步骤 7.1试样处理 称取试样4g（精确至0.01g），用乙腈定容至10mL，混匀1min，静置20min，离心5min。准确移取 1.00mL上清液用水定容至10mL并混匀，备用。同时做空白试验。 7.2提取液净化 膜并加载到活化好的净化反相柱上，弃去前3mL流出液，收集滤液，待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1仪器参考条件I 7.3.1.1色谱柱：以OH-为流动相，并能使用梯度洗脱的、高容量的阴离子交换柱，如IonPacAS-16 型色谱柱（4mm×250mm）和IonPacAG-16型保护柱2）（4mm×50mm），或性能相当的离子色谱柱。 7.3.1.2抑制器：ASRS-3004mm阴离子抑制器3，或性能相当的抑制器；外加水抑制模式，抑制器电流 为112mA~149mA,外加水流量1.2mL/min。 7.3.1.3淋洗液：氢氧根系淋洗液(4.6.1)，流速为1.0mL/min，梯度淋洗。梯度淋洗条件参见表1。 表1离子色谱仪淋洗液梯度淋洗条件（氢氧根体系） 序号 时间，min 流速，mL/min OH-浓度，mmol/L 0.0~13.0 1. 00 45. 0 13.1~18.0 1. 00 60. 0 18.1~23.0 1. 00 45. 0 1）OnGuard IIRP柱是商品名，此处列出仅供参考，并不涉及商业目的。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品， 2） 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 3） 品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 2 NY/T 3513—2019 7.3.1.4进样体积：100μL。 7.3.1.5柱温：30℃。 7.3.1.6电导池温度：35℃。 7.3.2仪器参考条件Ⅱ 7.3.2.1色谱柱：碳酸盐淋洗体系的高容量阴离子交换柱，如MetrosepAnionSupp5-150(4mm×150mm） 阴离子交换色谱柱和MetrosepAnionGuard(4mmX50mm)专用保护柱4，或性能相当的离子色谱柱。 7.3.2.2抑制器：MSMⅡI型抑制器5，抑制器再生液为硫酸溶液（4.7)。 7.3.2.3淋洗液：碳酸盐系淋洗液（4.6.2），流速为1.0mL/min。 7.3.2.4进样体积：100μL。 7.3.2.5柱温：30.0℃。 7.3.2.6电导池温度：40.0℃。 7.4标准系列溶液和试样溶液分析 按选定的仪器参考条件I或Ⅱ，对硫氰酸根标准系列溶液和试样溶液进行测定。不同淋洗液体系的 标准溶液色谱图参见附录A。 7.5定性 以硫氰酸根的保留时间定性，试样溶液中硫氰酸根的保留时间应与标准系列溶液（浓度相当)中硫氰 酸根的保留时间一致，其相对偏差在士2.5%之内。 7.6定量 以硫氰酸根的浓度为横坐标、色谱峰面积（或峰高）为纵坐标，绘制标准曲线，其相关系数应不低于 0.99。试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范围，应将试样溶液用水溶液稀释 n倍后，重新测定。 8试验数据处理 试样中硫氰酸根的含量以质量浓度w计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式(1)计算。 Xn .(1) m X Vz X 1000 式中： c一一待测溶液从标准曲线上查得硫氰酸根的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)； V，一一样品用乙睛提取时定容体积，单位为毫升（mL）； V²—一移取离心后上清液的体积，单位为毫升（mL）； V：一一上清液稀释定容的体积,单位为毫升（mL）； m ——试样质量,单位为克(g); n 一上机测定的试样溶液超出规定的范围后，进一步稀释的倍数。 计算结果保留至小数点后2位，用2次平行测定的算术平均值表示。 注：试样中测得的硫氰酸根离子含量乘以换算系数1.40，即得硫氰酸钠含量。 9精密度 在重复性条件下，2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 4）MetrosepAnionSupp5-150(4mm×150mm）阴离子交换色谱柱和MetrosepAnionGuard(4mm×50mm）专用保护柱是商品名， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的 产品。 5）MSMI型抑制器是商品名，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同 的效果，则可使用这些等效的产品。 NY/T3513—2019 附录A （资料性附录） 硫氰酸根离子色谱仪色谱图 A.1 氢氧根体系的硫氰酸根标准溶液离子色谱图 见图A.1。 电导，μs 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 一 0.50 0.0 14.0t,min 俊根标准溶液(0.5mg/L)离子色谱图（氢氧 根体系 TER R A.2 见图A.2。 电导率，μS/cm 15.40 SCN=12.85 15.20 15.00 14.80 14.60 14.40 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.