(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210960361.5 (22)申请日 2022.08.11 (71)申请人 贵州大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大 学 (72)发明人 陈竹　王晶琴　石贵阳　 (74)专利代理 机构 重庆信必达知识产权代理有 限公司 5 0286 专利代理师 刘会锋 (51)Int.Cl. G01N 33/00(2006.01) G01N 21/62(2006.01) G01N 5/04(2006.01) G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01)G06F 17/15(2006.01) (54)发明名称 不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低 磷指标筛 选方法 (57)摘要 本发明属于大豆遗传育种技术领域， 公开了 一种不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低 磷指标筛选方法， 所述不同基因型大豆苗期耐低 磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法包括： 通过对多 种不同大豆种质材料的多个指标数据进行主成 分分析、 隶属函数分析、 聚类分析及灰色关联度 分析， 进行苗期耐低磷性种质材料的筛选， 并筛 选得到耐低磷指标。 本发明通过对多种不同大豆 种质材料的多个指标进行主成分分析、 隶属函数 分析、 聚类分析及灰色关联度分析， 筛选出苗期 耐低磷性种质材料， 并筛选出耐低磷指标， 为大 豆耐低磷研究以及耐低磷品种的遗传改良、 品种 培育和筛选提供基础材 料。 权利要求书2页 说明书14页 附图2页 CN 115420849 A 2022.12.02 CN 115420849 A 1.一种不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特征在于， 所述 不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法通过对数种不同大豆种质材料 的多个指标数据进 行主成分分析、 隶属函数分析、 聚类分析及灰色关联度分析； 进 行苗期耐 低磷性种质材 料的筛选， 并筛选得到耐低磷指标。 2.如权利要求1所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述 不同基因型 大豆苗期耐低磷性 鉴定及耐低磷指标筛 选方法包括以下步骤： 步骤一， 选择数种不同的大豆种质材料， 并为每个品种的大豆设置两种不同的磷处理； 挑选大小一 致且饱满的大豆种子； 并对挑选的大豆种子进行处 理； 步骤二， 待大豆子 叶长出后， 将幼苗移至营养液中培养至三叶一心展开后进行缺素处 理， 12天后收获植株并测定相关性状； 步骤三， 基于测定的相关性状计算各测试指标耐低磷系数、 不同大豆基因型各综合指 标的隶属函数值、 各综合指标的权重、 各大豆品种的综合 耐低磷能力的大小、 灰色关联系数 及灰色关联度； 步骤四， 对计算得到的指标数据进行各单项指标的耐低磷系数及其相关性分析、 主成 分分析、 大豆品种综合评价、 灰色 关联分析以及聚类分析； 步骤五， 结合步骤四的各个分析结果确定大豆耐低磷 品种的鉴定结果以及大豆苗期 耐 低磷性的评价指标。 3.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 步骤一中所述为每个品种的大豆设置两种不同的磷处理包括： 为每个品种的大豆 设置正常供磷的对照处 理和低磷胁迫处 理； 且每个品种每 个处理设置3次生物学重复。 4.如权利要求3所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述正常供磷的对照处理包括： 采用0.5mmol/ L的KH2PO4进行处理； 所述低磷胁迫处 理即利用0.02m mol/L的KH2PO4进行处理。 5.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述对大豆种子进行处理包括： 利用1％次氯酸钠对所述大豆种子进行灭菌处理； 并利用无菌水进行浸种； 同时在 恒温避光的环境下进行 大豆种子的培 养。 6.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述测定相关性状包括： 进行光合特征参数的测定： 选取倒三叶， 于上午9： 00 ‑11： 00采用光合仪测定净光合速率、 气孔导度、 胞间CO2浓度和蒸腾速率等光合特性参数， 每张 叶片测定 3次取其平均值， 所有参数 数据重复3次； 进行光合色素含量的测定： 选取倒三叶， 去除中脉， 采用乙醇浸提法， 测定并计算叶绿 素a、 叶绿素b和类胡萝卜素的含量； 进行形态指标及生物量测定： 测量大豆株高、 茎粗以及叶面积； 以子叶节为界， 将植株 分为茎叶和根系， 分别称量根及茎叶鲜重后， 于105℃杀青30min， 并在75℃下烘干至恒重， 分别称量茎叶及根干 重， 并计算 根冠比。 7.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述基于测定的相关性状计算各测试指标耐低磷系 数、 不同大豆基因型各综合指 标的隶属函数值、 各综合指标的权重、 各大豆品种的综合 耐低磷能力的大小、 灰色关联系数 及灰色关联度包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115420849 A 21)各测试指标耐低磷系数计算如下： 耐低磷系数＝低磷处理下性状测得值/正常磷处 理下性状测得值 ×100％； 2)不同大豆基因型 各综合指标的隶属函数值计算如下： u(Xj)＝(Xj‑Xmin)/(Xmax‑Xmin)j＝1， 2， 3， . ..， n； 其中， μ(Xj)表示第j个 综合指标的隶属函数值， Xj表示第j个 综合指标值； Xmax表示第j个 综合指标的最大值， Xmin表示第j个综合指标的最小值； 3)各综合指标的权 重的计算如下： 其中， wj表示第j个综合指标在所有综合指标中的重要程度及 权重； pj表示各品种第j个 综合指标的贡献率； 4)各大豆品种的综合耐低磷能力的大小计算如下： 其中， D表示在低磷胁迫条件下 各品种耐低磷能力的综合评价 值； 5)灰色关联系数及灰色 关联度计算如下： 以各指标LPTC值为比较序列， D值为参考序列进行灰色关联度分析， 确定各指标LPTC值 与D值间的关联系数ξi(k)及关联度(γi)： k＝1， 2， 3， . ..， n； i＝1， 2， 3， . ..， n； 其中， 表示二级最小差， 表示二级最大差， ρ表示 分辨系数。 8.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述进行大豆品种综合评价包括： 基于计算的各大豆品种的综合耐低磷能力的大 小对各大豆品种的耐低磷性进 行强弱排序； 并采用最大距离法对各大豆品种的综合耐低磷 能力的大小值进行聚类分析， 将供试基因型大豆划分为耐低磷类型、 中度耐低磷类型以及 弱耐低磷类型共3类。 9.如权利要求2所述不同基因型大豆苗期耐低磷性鉴定及耐低磷指标筛选方法， 其特 征在于， 所述进行灰色关联分析包括： 将各大豆品种的综合耐低磷能力的大小值作为参考 序列， 各指标耐低磷系 数作为比较序列， 建立灰色系统； 通过灰色关联分析法， 对各形态以 及生理生化指标进 行综合评价， 确定比较序列即LPTC值与参考序列为D值的关联关系， 并确 定各指标在耐低磷特性评 定中的作用强弱。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115420849 A 3