(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211291568.4 (22)申请日 2022.10.19 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 斯科　王子筝　龚薇　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 林超 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01) G01N 1/36(2006.01) G01N 21/65(2006.01) (54)发明名称 一种适用 于无标记成像的透明试剂及透明 化方法 (57)摘要 本发明公开了一种适用于无标记成像的透 明试剂及透明化方法。 透明试剂由尿素、 表面活 性剂、 甲酰胺和咪唑溶于蒸馏水形成， 尿素、 表面 活性剂、 甲酰胺、 咪唑分别与蒸馏水的质量体积 比为20％ ‑45％、 0.05％ ‑5％、 5％ ‑30％、 5％ ‑ 25％； 方法包括生物组织的获取和固定， 将生物 组织浸泡在透明试剂中进行透明化处理， 待透明 化处理完成后， 将生物组织封片、 成像。 本发明提 出的透明试剂能很好的进行透明处理， 能够大大 缩短生物样品处理的时间， 成分简单， 成本较低， 简单易行， 适用性广。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 115541343 A 2022.12.30 CN 115541343 A 1.一种适用于无 标记成像的透明试剂， 其特 征在于： 所述透明试剂是主要由尿素、 表面活性剂、 甲酰胺和咪唑溶于蒸馏水中形成的混合试 剂； 所述尿素与蒸馏水的质量体积比为20％ ‑45％； 所述表面活性剂与蒸馏水的体积比为0.0 5％‑5％； 所述甲酰胺与蒸馏水的体积比为5％ ‑30％； 所述咪唑与蒸馏水的质量体积比为5％ ‑25％。 2.根据权利要求1所述的一种适用于无 标记成像的透明试剂， 其特 征在于： 所述表面活性剂包括但不限于 十二烷基苯磺酸钠、 C HAPS、 TritonX‑100。 3.权利要求1所述适用于无标记成像的透 明试剂的应用， 其特征在于： 在离体生物组织 透明化处 理、 离体生物成像中的应用。 4.一种透明化方法， 其特 征在于， 方法包括以下步骤： 1)生物组织的获取和固定； 2)将步骤1)获得的生物组织浸泡在权利要求1所述的透明试剂中进行透明化处 理； 3)待透明化处 理完成后， 将生物组织封片、 成像。 5.根据权利要求 4所述的一种透明化方法， 其特 征在于： 所述的生物组织 为脑、 脾脏、 肾脏、 心脏、 肝脏或肺组织。 6.根据权利要求 4所述的一种透明化方法， 其特 征在于： 所述步骤2)中的浸泡在恒定温度和振荡情况下进行， 温度为20 ‑50摄氏度， 振荡速度为 20‑80rpm/mi n。 7.根据权利要求 4所述的一种透明化方法， 其特 征在于： 所述步骤3)中的封片采用与生物组织厚度匹配的垫片、 载玻片、 盖玻片封片。 8.根据权利要求 4所述的一种透明化方法， 其特 征在于： 所述的成像为无 标记成像。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115541343 A 2一种适用于无标记成像的透明试剂及透明化方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物样品处理和生物医学成像领域的一种样品处理试剂和处理方法， 尤其是涉及了一种适用于无 标记成像的透明试剂及透明化方法。 背景技术 [0002]传统的光学显微镜依靠荧光标记物来对特定分子或物质进行标记才能够成像。 但 是荧光标记存在标记不均匀、 光漂白、 荧 光剂干扰细胞功能、 无法标记小分子等问题。 [0003]而无标记成像方式不需要特定 的分子标记物， 就能够对样品进行成像。 典型的无 标记方式有光学相干层析成像、 拉曼显微成像、 光声层析成像等。 由于 没有引入染料或荧光 蛋白， 这种特性在临床应用中， 如肿瘤检测、 药物分析等领域具有重要意 义和前景。 [0004]但是无标记成像方式的信号较弱， 如广泛应用的受激拉曼散射成像方式， 随生物 组织深度增加， 对光的散射和吸收会导致信号强度极大地减弱， 因此未做光透明处理的组 织成像深度被限制在百微米之内。 [0005]此外， 由于拉曼成像信号来源于分子键振动， 现有的绝大部分光透明方法所用物 质都与目标物质有重 叠的拉曼信号峰， 因此不兼容。 发明内容 [0006]为了解决背景技术中存在的问题， 本发明的目的在于提出一种适用于无标记成像 的透明试剂及透明化方法， 该试剂本身的透明效果好， 速度快， 能够对生物组织进行快速、 无损的透明， 获得高质量的成像效果。 [0007]为了实现上述目的， 本发明的技 术方案包括以下顺序步骤： [0008]一、 一种适用于无 标记成像的透明试剂： [0009]所述透明试剂是主要由尿素、 表面活性剂、 甲酰胺和咪唑溶于蒸馏水中形成的混 合试剂； [0010]所述尿素与蒸馏水的质量体积比为20％ ‑45％； [0011]所述表面活性剂与蒸馏水的体积比为0.0 5％‑5％； [0012]所述甲酰胺与蒸馏水的体积比为5％ ‑30％； [0013]所述咪唑与蒸馏水的质量体积比为5％ ‑25％。 [0014]所述的尿素为市售产品， 是主要的透明化成分， 加入能够提高试剂的折射率， 从而 提高生物组织的透明度。 [0015]所述表面活性剂包括但不限于十二烷基苯磺酸钠、 CHAPS、 TritonX ‑100， 能够轻度 改变细胞膜结构， 加速 透明化进程。 [0016]所述甲酰胺为市售产品， 加入能够提高试剂的折 射率。 [0017]所述的咪唑为市售产品， 加入后能够加速透明试剂对于生物组织的渗透， 从而缩 短透明所需的时间。 [0018]所述透明试剂在离体生物组织透明化处 理、 离体生物成像中应用。说　明　书 1/4 页 3 CN 115541343 A 3