(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211058297.8 (22)申请日 2022.08.30 (71)申请人 河南师范大学 地址 453007 河南省新乡市牧野区建 设东 路46号 (72)发明人 冯世坤　周瑞芝　李慧　 (74)专利代理 机构 新乡市平 原智汇知识产权代 理事务所(普通 合伙) 41139 专利代理师 郝怀庆 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01) G01N 1/34(2006.01) G01N 1/44(2006.01) (54)发明名称 一种细胞骨架实验样品的快速制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种细胞骨架实验样品的快 速制备方法， 撕取洋葱鳞茎内表皮， 加入磷酸盐 缓冲液， 待洋 葱鳞茎内表皮下沉后， 微波处理； 吸 去磷酸缓冲液， 加入抽提剂1wt%Triton  X‑100溶 液覆盖洋葱样品， 微波处理； 吸去抽提剂， 用M ‑缓 冲液浸泡洗涤， 微波处理； 吸去M ‑缓冲液， 加入固 定液3wt%戊二醛溶液覆盖洋葱样品， 微波处理； 吸去固定液， 用磷酸盐缓冲液浸泡洗涤， 微波处 理； 吸去磷酸盐缓冲液， 加0.2wt%考马斯亮蓝 R250染液微波处理； 用蒸馏水冲洗去 除浮液， 加 盖玻片观 察。 本发明采用微波处理后整个实验 过 程可以缩短到2个小时内完成， 处理后细胞骨架 结构清晰、 完整， 整体操作简单， 可以在本 科实验 中推广使用。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115524185 A 2022.12.27 CN 115524185 A 1.一种细胞骨架实验样品的快速制备 方法， 其特 征在于具体步骤为： 步骤S1， 撕取洋葱鳞茎内表皮置于正方体塑料盒中， 加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液， 待 洋葱鳞茎内表皮下沉后， 置 于微波炉中于 30‑40℃加热处 理2min； 步骤S2， 吸去磷酸缓冲液， 加入抽提剂1wt%  Triton X‑100溶液覆盖洋葱样品， 置于微 波炉中于 30‑40℃加热处 理5min； 步骤S3， 吸去抽提剂， 用M ‑缓冲液浸泡洗涤3次， 每次均置于微波炉中于30 ‑40℃加热处 理2min， 其中M ‑缓冲液由50mmol/L咪唑、 50mmol/L氯化钾、 0.5mmol/L氯化镁、 1mmol/L   EGTA、 0.1m mol/L乙二胺四乙酸和1m mol/L β‑巯基乙醇组成； 步骤S4， 吸去M ‑缓冲液， 加入固定液3wt%戊二醛溶液覆盖洋葱样品， 置于微波炉中于 30‑40℃加热处 理5min； 步骤S5， 吸去固定液， 用磷酸盐缓冲液浸泡洗涤3次， 每次均置于微波炉中于30 ‑40℃加 热处理2min； 步骤S6， 吸去磷酸盐缓冲液， 加0.2wt%考马斯亮蓝R250染液置于微波炉中于30 ‑40℃加 热处理3min； 步骤S7， 用蒸馏水冲洗1 ‑2次去除浮液， 加盖玻片观察。 2.根据权利要求1所述的细胞骨架实验样品的快速制备方法， 其特征在于： 步骤S2中所 述抽提剂1wt % Triton X‑100溶液由M‑缓冲液配制。 3.根据权利要求1所述的细胞骨架实验样品的快速制备方法， 其特征在于： 步骤S4中所 述固定液3wt %戊二醛溶液由磷酸盐缓冲液配制。 4.根据权利要求1所述的细胞骨架实验样品的快速制备方法， 其特征在于步骤S6中所 述0.2wt%考马斯亮蓝R250染液的溶剂由以下体积百分含量的溶液 组成： 甲醇46.5%、 冰醋酸 7%和蒸馏水46.5%。 5.根据权利要求1所述的细胞骨架实验样品的快速制备方法， 其特征在于： 每个步骤中 的样品在微波炉中处理 时需要置于盛满水的烧杯中， 每次处理结束后要及时更换烧杯中的 水以避免烧杯中水的温度超过40℃。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115524185 A 2一种细胞骨架实验样品的快速制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于细胞骨架实验样品技术领域， 具体涉及一种细胞骨架实验样品的快速 制备方法。 背景技术 [0002]细胞骨架是在真核细胞内部可观察到的纤维状的网状立体结构， 细胞骨架主要包 括微管、 微丝和中间纤维。 细胞骨架在维持细胞形态、 细胞运动、 细胞内物质运输等一系列 方面均有重要作用， 因此， 细胞骨架是近代细胞生物学研究最活跃的领域之一， 也是细胞生 物学实验的重要内容。 [0003]近年来， 不断有学者对细胞骨架实验进行了探索优化， 谭娟、 钱鑫萍、 付秀芹、 佟树 坤、 冯振月等分别对细胞骨架观察实验的条件进行了探索， 对抽提试剂浓度、 抽提时间、 固 定液、 固定时间及染色时间等步骤做了优化， 但都沿用了经典的考马斯亮蓝染色法， 该方法 多采用植物细胞作为 实验材料， 经Tr iton X‑100处理细胞后保留细胞骨架蛋白， 又经M缓冲 液稳定肌动蛋白， 再经戊二醛固定， 最后用考马斯亮蓝 ‑R250染色， 每个环节之后均用PBS漂 洗， 整个过程需持续3 ‑4个小时， 虽然实验操作简单， 但耗时相对冗 长。 发明内容 [0004]本发明解决的技术问题是提供了一种细胞骨架实验样品的快速制备方法， 该方法 能够极大提高时间利用效率。 [0005]本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案， 一种细胞骨架实验样品的快速制 备方法， 其特 征在于具体步骤为： 步骤S1， 撕取洋葱鳞茎内表皮置于正方体塑料盒中， 加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲 液， 待洋葱鳞茎内表皮下沉后， 置 于微波炉中于 30‑40℃加热处 理2min； 步骤S2， 吸去磷酸缓冲液， 加入抽提剂1wt%  Triton X‑100溶液覆盖洋葱样品， 置 于微波炉中于 30‑40℃加热处 理5min； 步骤S3， 吸去抽提剂， 用M ‑缓冲液浸泡洗涤3次， 每次均置于微波炉中于30 ‑40℃加 热处理2min， 其中M ‑缓冲液由50mmol/L咪唑、 50mmol/L氯化钾、 0.5mmol/L氯化镁、 1mmol/L   EGTA、 0.1m mol/L乙二胺四乙酸和1m mol/L β‑巯基乙醇组成； 步骤S4， 吸去M‑缓冲液， 加入固定液3wt%戊二醛溶液覆盖洋葱样品， 置于微波炉中 于30‑40℃加热处 理5min； 步骤S5， 吸去固定液， 用磷酸盐缓冲液浸泡洗涤3次， 每次均置于微波炉中于30 ‑40 ℃加热处 理2min； 步骤S6， 吸去磷酸盐缓冲液， 加0.2wt%考马斯亮蓝R250染液置于微波炉中于30 ‑40 ℃加热处 理3min； 步骤S7， 用蒸馏水冲洗1 ‑2次去除浮液， 加盖玻片观察。 [0006]进一步限定， 步骤S2中所述抽提剂1wt % Triton X‑100溶液由M‑缓冲液配制。说　明　书 1/5 页 3 CN 115524185 A 3